甲基化特异性PCR全程易出现的问题与控制措施
亚硫酸氢钠修饰DNA的目的是将DNA序列中未甲基化的胞嘧啶完全转化为尿嘧啶,而甲基化的5-甲基胞嘧啶保持不变。影响此过程的主要因素其中任何一个环节出现问题都将导致MSP扩增失败。
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SNP研究中的经验和问题
对于SNP 研究,我个人的感觉是:曾经非常的“热”过,而现在,似乎有些降温。这种降温在国内的研究领域内主要表现为:SNP研究做得非常多,甚至有些滥了,就象前面有的战友说的,随便做点PCR就可以在国内的杂志发文章了,文章太多太滥,没有多大的价值。对于国外SNP研究领域,我认为现在也进入了理性思考期。SNP的文章还有很多,但是研究的思路和风格已经和以往不同了。记得2002- ...
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PCR技术系列十六:PCR产物测序
PCR技术代替了为测序而反复进行的分子克隆和模板制备步骤。PCR技术与自动测 序技术相结合后,它将成为一种最快、最有效的测定核苷权序列的方法。本章主要综 述各种测模板的制备以及如何完成PCR产物的直接测序。与传统的将PCR片段克隆入质 粒或病毒基因组相比,直接序列分析有两个主要的优点:1)由于它是一个不依赖于生 物体(如细菌、病毒等)的体外系统,因而它更容易标准化(即例于自化2);对于每个待 测样 ...
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SOE PCR
PCR技术:PCR片段拼接的SOE和SDL方法PCR技术(多聚酶链式反应)是现代分子生物学的一个巨大突破,它能在体外迅速、 大量、灵敏地扩增基因片段。可是,经PCR技术扩增的大量相关基因片段如何能有效 拼接,却是一个很值行探讨的问题。传统的方法是引入限制性内切酶位点,这不但操 作繁杂,而有时为了构建限性位点还会影响解读三联密码的正确性。本介绍两种基因 拼接的新方法,即SOE和SDL法,就能巧妙地解决这个问题。SOE法 1989年,H ...
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