通用引物序列
M13 Forward(-20)5’d3’M13 Forward(-40)5’d3’M13 Reverse5’d3’T7 Promoter5’d3’T3 Promoter5’d3’Sp6 Promoter5’d3’M13/pUC Reverse5’d3’M13/pUC Forward5’d3’ 上一篇:如何设计引物 下一篇:实时PCR/RT-PCR解决方案
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PCR技术系列十四:反向PCR
描述一种大聚合酶链反应(PCR)应用的方法,使在已知序列的核心区边侧的未知 DNA成几何级数扩增。用适当的限制性内切裂解含核心区的DNA,以产生适合于PCR扩 增大小的片段,然后片段的末端再连接形成环状分子。PCR的引物同源于环上核心区 的末端序列,但其方向性,使链的延长经过环上的未知区而不是分开引物的核心区。 这种反向PCR方法可用于扩增本来就在核心区旁边的序列,还可应用于制备未知序列 探针或测 ...
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PCR实用大全
PCR引物设计的11条黄金法则一、引物最好在模板cDNA的保守区内设计。DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因,通过序列分析软件(比如DNAman)比对(Alignment),各基因相同的序列就是该基因的保守区。二、引物长度一般在15~30碱基之间。引物长度(primer length)常用的是18-27 bp,但不应大于38,因为过长会导致 ...
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【求助】7000bp左右的片段,用PCR的方法怎么样可以获得?
hanrui1009 小女子是新手,最近忙于做一个抗病基因的克隆,基因的片段大小7010bp左右,打算采用PCR的方法克隆,Taq LA polymerse和29bp的特异性引物,扩增不出来,请高手指点啊!zjubell 扩不出来太正常了。可能你的模板根本就没有,或者降解,或者表达很低。另一方面,这么长,聚合酶可能在中途就掉下来了。建议你分段扩增。比如分成5-10个PCR,每段扩600-800bp,设计一些overlap的区域。最好 ...
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