队列建立与血清样本采集
获取疫苗接种者不同时间点的血清样本,以评估抗体应答的纵向变化。
收集接受两剂BNT162b2或CoronaVac疫苗的健康个体血清,并对CoronaVac组部分个体进行BNT162b2加强。
Waning and boosting of antibody Fc-effector functions upon SARS-CoV-2 vaccination.
研究包含两个独立证据层级:基于人类血清样本的系统血清学分析(包括抗体结合、Fc受体结合、功能检测及糖基化分析),并结合多种功能实验(ADCD、ADNP、ADCP、NK细胞激活),以及加强免疫前后的纵向比较。
人血清样本(来自CoronaVac或BNT162b2疫苗接种者) THP-1单核细胞系 健康供者中性粒细胞 健康供者NK细胞
疫苗平台:CoronaVac(灭活疫苗)与BNT162b2(mRNA疫苗) 样本量:BNT162b2组n=15,CoronaVac组n=34,其中23人接受BNT162b2加强 采样时间点:基线、首剂后、第二剂后、2-3个月衰减期、4-5个月衰减期、加强后14-31天 检测指标:Spike和RBD特异性IgG1、Fcγ受体(IIA、IIB、IIIA、IIIB)结合、ADCD、ADNP、ADCP、NK细胞激活、抗体糖基化 加强方案:CoronaVac初免后接受BNT162b2加强
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
获取疫苗接种者不同时间点的血清样本,以评估抗体应答的纵向变化。
收集接受两剂BNT162b2或CoronaVac疫苗的健康个体血清,并对CoronaVac组部分个体进行BNT162b2加强。
检测Spike和RBD特异性抗体的亚类、IgG1水平和Fcγ受体结合能力。
使用Luminex多重检测平台定量抗体亚类、IgG1以及FcγRIIA、IIB、IIIA、IIIB结合水平。
评估抗体依赖的补体沉积、吞噬和NK细胞激活功能。
使用流式细胞术检测ADCD、ADNP、ADCP和NK细胞激活(CD107a、IFN-γ、CCL4表达)。
探索疫苗诱导的抗体Fc糖基化变化及其与功能的相关性。
对WT Spike特异性IgG进行糖基化分析,检测岩藻糖基化、二等分GlcNAc和半乳糖基化水平。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 抗体结合和Fc受体结合分析 | MagPlex微球 | Luminex | -- |
| Fc受体结合检测 | PE标记链霉亲和素 | Agilent Technologies | -- |
| 抗人IgG1-PE | Southern Biotech | HP6001 | |
| 抗人IgG2-PE | Southern Biotech | 31-7-4 | |
| 抗人IgG3-PE | Southern Biotech | HP6050 | |
| 抗人IgG4-PE | Southern Biotech | HP6025 | |
| 抗人IgM-PE | Southern Biotech | SA-DA4 | |
| 抗人IgA1-PE | Southern Biotech | HP6025 | |
| ADNP | 抗CD66b Pac Blue | BioLegend | 305112 |
| ADNKA | 抗CD107a | BD Biosciences | 555802 |
| 抗CD3 | BD Biosciences | 558117 | |
| 抗CD16 | BD Biosciences | 557758 | |
| 抗CD56 | BD Biosciences | 557747 | |
| 抗IFNγ | BD Biosciences | 340449 | |
| 抗CCL4 | BD Biosciences | 550078 | |
| ADCD | 抗C3b | MP Biomed | 855385 |
| 抗原 | SARS-CoV-2野生型S蛋白 | Sino Biological | 40589-V08H4 |
| SARS-CoV-2野生型受体结合域 | Sino Biological | 40592-V08H | |
| SARS-CoV-2 Alpha变体S蛋白 | Sino Biological | 40589-V08B6 | |
| SARS-CoV-2 Alpha变体RBD | Sino Biological | 40592-V08H82 | |
| SARS-CoV-2 Beta变体S蛋白 | Sino Biological | 40589-V08B7 | |
| SARS-CoV-2 Beta变体RBD | Sino Biological | 40592-V08H59 | |
| SARS-CoV-2 Gamma变体S蛋白 | Sino Biological | 40589-V08B10 | |
| SARS-CoV-2 Gamma变体RBD | Sino Biological | 40592-V08H86 | |
| SARS-CoV-2 Delta变体S蛋白 | Sino Biological | 40589-V08B16 | |
| SARS-CoV-2 Delta变体RBD | Sino Biological | 40592-V08H115 | |
| SARS-CoV-2 Omicron变体S蛋白 | Sino Biological | 40589-V08H26 | |
| SARS-CoV-2核衣壳蛋白 | Sino Biological | 40588-V08B | |
| SARS-CoV-2 Omicron变体RBD | Sino Biological | 40592-V08H121 | |
| 人冠状病毒OC43 S蛋白 | Sino Biological | 40607-V08B | |
| 人冠状病毒HKU1 S蛋白(N5分离株) | Sino Biological | 40606-V08B | |
| 人巨细胞病毒糖蛋白B | Sino Biological | 10202-V08H1 | |
| ADCD | 豚鼠补体 | Cedarlane | CL4051 |
| ADNKA | 蛋白质转运抑制剂 | BD Biosciences | 554724 |
| 布雷菲德菌素A | Sigma | B7651 | |
| 生物素化 | NHS-Sulfo-LC-LC试剂盒 | ThermoFisher | 21435 |
| Zebra-Spin脱盐和色谱柱 | ThermoFisher | 89882 | |
| NK细胞分离 | RosetteSep NK富集试剂盒 | Stem Cell Technologies | 15065 |
| ADNKA | Fix & Perm细胞透化试剂盒 | ThermoFisher | GAS002S-100 |
| 数据采集 | iQue Screener Plus | Intellicyt/Sartorius | 11811 |
| iQue Forecyt 9.1 | Sartorius | 60028 | |
| 高通量洗涤 | 384孔HydroSpeed洗板机 | Tecan | 30190112 |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 队列和样本采集 | 疫苗平台、剂量、时间间隔、样本量、采样时间点、人群特征 阅读提示:Methods: Experimental model and participants details, Table 1, Table 2 |
| 抗体结合和Fc受体结合 | 抗原类型、血清稀释度、Luminex耦合条件、检测抗体 阅读提示:Methods: Immunoglobulin isotype and Fc receptor binding, Table 3 |
| 功能抗体检测 | 抗原(WT和Omicron Spike)、血清稀释度、效应细胞(THP-1、中性粒细胞、NK细胞)、供者数量、检测指标 阅读提示:Methods: Evaluation of antibody-mediated functions |
| 糖基化分析 | 样本时间点、抗原、抗体耦联、酶切、标记和分析方法 阅读提示:Methods: Glycosylation analysis |