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实验问答

27,435,615 科研人在看

问为什么曝光出来目的条带总是黑黑的一团，而不是一个小条带？

benjimmy33108

建议上述liona_lin的建议：降低上样量，降低一抗浓度以及调整曝光时间

5 回答4248 围观

问逆转引物的选择问题

parashorea

如果你的逆转录的目的是QPCR的话，选择同时含有oligo T 和Random primier双引物，如果你的目的是克隆基因的话，选择oligo dT.

2 回答1424 围观

问目的基因片段电泳鉴定无结果是为什么？

hl16010921

1.先对比引物序列，看序列是否真的评分很高（文献的也要自己重新查，文献审稿时引物错误是没人挑的）2.引物质量很重要，PCR不出结果，可以不付帐。换一家试试。有的公司引物合成时好时坏。3.引物的保存不当。4.PCR体系中有强的抑制Taq的物质（抽提污染或水的质量不高）5.是否有引物二聚体？有的话证明PCR还在进行，但条件不好。如果没有证明PCR没进行。6.dNTP降解也有可能。7。ULYSSEESW

2 回答2725 围观

问用乙醇沉淀质粒时只能看到一点点沉淀是什么原因？

yeselanshan

没有盐，还有就是加乙醇后一定得混匀。

2 回答4024 围观

问在 NCBI 查询到人类的 CD209 有好多条 mRNA 该如何选取？

dengchch

有好多条mRNA是因为这个基因有不止一个转录本，一般情况下是选择最长的转录本进行克隆，当然如果别人有报道说不同的转录本有不同的功能的话最好还是都克隆并研究一下。基因的编码区和启动子序列在NCBI网站上都能查到，你搜索时用gene这个选项卡，然后搜你的基因，在结果中选人的该基因，然后分别去找相关信息。其中编码区就是CDS。设计引物时，如果你要克隆基因，那肯定引物要在CDS区两端，因为你要扩的是完整的

2 回答2957 围观

问电泳，有时抛出两条条带，有时是一条条带，两条条带分子量相差不大，可能是什么原因造成的？

hl16010921

1.电泳的原因，相差不大的蛋白有时没有分开。染色，脱色未到最佳等。就是两条带没分开，或丢失一条。2.样品原因。部分降解，修饰（磷酸化，乙酰化等），相近蛋白的干扰。3.样品原因的话，某一样品结果是不可逆的，一条带变两条，而后该样品一直是两条带。电泳的问题是随机的，忽而一条，忽而两条。4.电泳，问题可能大。稳定电泳条件，特别是防止局部过热。

3 回答4348 围观

问RT-PCR 特异性，实验组和阳性及阴性对照组最后都出现了目的条带是为什么？

hl16010921

1.人或哺乳动物的保守基因可能是操作者带来的污染。（这点很容易被忽视，尤其是老手）2.多样品时加样失误，用排管或板时有时出现。3.试剂或水的污染尤其是公共试剂。4.电泳点样或上样时混入。5.误将引物二聚体当做目的带了（目的带低于100bp时或目的带没出，无marker时可能性大）6.都换新的重做。同时PCR时一定带手套，做实验前拖地，清洁台面，把头发，胡子包一下，不要有人员走来走去。

3 回答1853 围观

问关于质粒筛选中的抗生素使用

赤脚草医

可以的，两者都是氨基糖苷类抗生素，都是抑制蛋白合成达到杀细胞作用，我也是用的neomycin抗性质粒，G418筛选，付个质粒的详细文件你看下。。。。。怎么传不了PDF文件？

2 回答3299 围观

问p 一段 579bp 的基因，p 了 n 次都没成功是为什么？

benjimmy33108

如果就是第二个碱基一个有多态性，那么一般不会有多大影响的，建议你换一个聚合酶试一试，我P过很基因，有些基因就是有一些酶怎么设置都P不出来，结果其他几种可能就能P出来，或者你可以拿最普通的2X预混的先摸一下退货温度之后，看看能否P出来，再进行高保真的PCR.

2 回答2266 围观

问求无进展生存率（DFP）的计算方法？

elite_xy

简单说，就是一个病例从你给他治疗开始算，如果你每2个月做一次随访的话，如果第6个月病例的病情有所发展，那么他的PFS就是4个月。当然有些病人的病例不会有发展，统计一下无发展的人数，除以病例数就可以了

2 回答3105 围观

问在 DNA 的退火过程中，不小心把温度搞到 45℃（要求55℃）了，怎么办？

elite_xy

毫无影响，希望你不是说退火温度设定到了45℃

1 回答1794 围观

问鼻咽癌 CNE2 细胞培养过程中形态为啥会变（梭型变成多边形）？

dengchch

其实CNE2也不是完全是梭形吧。有的是梭形，有的多边形，尤其是像CNE2这种细胞。我们研究部有挑过CNE2细胞的单克隆，发现一些克隆是主要呈梭形，一些则呈现多边形或不规则形状，梭形的细胞一般恶性较强。所以CNE2可以认为是一个混杂了多种类型细胞的细胞系，这其实也符合癌症细胞异质性的理论。我觉得只要细胞状态正常，性状与之前基本一致，确定没有其它细胞污染，就可以用来做实验。

1 回答2786 围观

问提取多少核酸够用？

ULYSSEESWB

做预实验啊。。。提取rna至少需要6孔板级别的，至少2孔以上吧，细胞瓶绝对是够了

1 回答1105 围观

问如何动态观察细胞的生长情况

1 回答2005 围观

问荧光定量 PCR 扩增曲线呈现锯齿状是什么原因？

elite_xy

锯齿，应该是一上一下吧，好诡异的曲线，好困惑的问题，从没见过，建议全套realtime试剂盒全换，或者用现有的试剂盒去另一台机器试试

1 回答1296 围观

问蛋白样本能保存多久？

我是金博士

可以的，已经变性了，所以可以放置很长时间，不过要注意一下标记，长时间保存，保存的记号容易变淡，这点注意一下就好了，还会实验条件之类的。

1 回答7617 围观

问PCR 结果出现弥散现象的原因？

ziye_1988

有很多原因啊，比如说模板加的太多了，建议体系参考酶的说明书，具体原因和解决办法参照分子克隆上册PCR那一张（好像是第八章）~

1 回答1526 围观

问求问 2Xlaemmli sample buffer 怎么配制？

liona_lin

1. Sample Buffer, Laemmli 2× Concentrate:Solution contains 4% SDS, 20% glycerol, 10% 2-mercaptoethanol, 0.004% bromphenol blue and 0.125 M Tris HCl, pH approx. 6.8.2. SDS gel-loading buffer (2X) 100 m

1 回答1476 围观

问冰冻切片免疫双染的背景问题

2057 围观

问家兔颈总动脉如何提取 RNA

liona_lin

您可以尝试用研钵加液氮研磨法提取

1 回答2159 围观

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