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问
如何根据CT值计算分析实验结果?
此用户已注销
内参大概16-22之间吧,太靠后也不好;目的基因,最好30之前,但有的情况,起峰会很晚,最好做无模版对照,即NC对照,NC理论上不会起峰,或在NC之前5-6个起峰的数值可用;
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问
为什么曝光出来目的条带总是黑黑的一团,而不是一个小条带?
benjimmy33108
建议上述liona_lin的建议:降低上样量,降低一抗浓度以及调整曝光时间
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问
有人做过免疫组化,一抗用NF-KB么?求阳性结果图。
伊一1
可以查文献找图,有的公司网站上有对应抗体的图,还有就是找阳性对照组织做,最后建议你弄个阴性对照,就是用PBS代替一抗,这样更利于对比
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问
western相关试剂怎么选?
我是金博士
BSA 亚科的我们用3%封闭液我们一般用3-5次,4度保存是的用undefined的洗涤缓冲液,这几个蛋白我们做的多了,easy
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问
逆转引物的选择问题
parashorea
如果你的逆转录的目的是QPCR的话,选择同时含有oligo T 和Random primier双引物,如果你的目的是克隆基因的话,选择oligo dT.
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问
关于质粒筛选中的抗生素使用
赤脚草医
可以的,两者都是氨基糖苷类抗生素,都是抑制蛋白合成达到杀细胞作用,我也是用的neomycin抗性质粒,G418筛选,付个质粒的详细文件你看下。。。。。怎么传不了PDF文件?
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问
p 一段 579bp 的基因,p 了 n 次都没成功是为什么?
benjimmy33108
如果就是第二个碱基一个有多态性,那么一般不会有多大影响的,建议你换一个聚合酶试一试,我P过很基因,有些基因就是有一些酶怎么设置都P不出来,结果其他几种可能就能P出来,或者你可以拿最普通的2X预混的先摸一下退货温度之后,看看能否P出来,再进行高保真的PCR.
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问
粪便DNA做荧光定量PCR是否一定需要标准菌株?
helen_gu
做16s吗?可能引物设计比较困难,一般特异性不够,可能会扩出其他的菌
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问
蛋白放入-80之前还需要加蛋白酶抑制剂吗?
我是金博士
装冻存,避免反复冻融,尽快检测。不用加蛋白酶抑制剂
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问
如何动态观察细胞的生长情况
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问
提蛋白时将同组标本随机两两混合了,即(2con:2处理)。请问这样可以吗?
我是金博士
1、你为啥要这么写在文章中呢。。。2、这样做当然是可以的 3、别人的文献中肯定不会这些写撒
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问
从细胞提蛋白,浓度总是不高?
我是金博士
跑电泳染胶看看结果图可以放上来Bradford对很多东西比较敏感,比如urea
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问
荧光定量 PCR 扩增曲线呈现锯齿状是什么原因?
elite_xy
锯齿,应该是一上一下吧,好诡异的曲线,好困惑的问题,从没见过,建议全套realtime试剂盒全换,或者用现有的试剂盒去另一台机器试试
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问
蛋白样本能保存多久?
我是金博士
可以的,已经变性了,所以可以放置很长时间,不过要注意一下标记,长时间保存,保存的记号容易变淡,这点注意一下就好了,还会实验条件之类的。
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问
WB 实验为什么会出现无目的条带?
我是金博士
膜上无蛋白,可能样品降解或者上样量太少了
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问
曝光图上可以看到非特异性吸附很多,MARKER 也出现了条带,请问怎样可以改变该现象?
我是金博士
一抗用1:1000,二抗用1:5000试试。
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问
我用 CST 的 eNOS 一抗,RIPA(强)提取人脐静脉内皮细胞,做了几次了也一直没出来条带?
我是金博士
eNOS 这个不是很好做,呵呵内参做的很好?转膜后丽春红染膜了吗
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问
求问 2Xlaemmli sample buffer 怎么配制?
liona_lin
1. Sample Buffer, Laemmli 2× Concentrate:Solution contains 4% SDS, 20% glycerol, 10% 2-mercaptoethanol, 0.004% bromphenol blue and 0.125 M Tris HCl, pH approx. 6.8.2. SDS gel-loading buffer (2X) 100 m
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问
SD 大鼠的心肌标本,一抗二抗如何选择?
我是金博士
一抗选择能与你的种属来源起交叉反应的二抗选择:如果一抗来源是小鼠,二抗选择什么抗小鼠,以此类推。
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问
做目的蛋白时压出来都是白板,不知道为什么?会是目的蛋白的一抗有问题吗?
我是金博士
1、调整一下GAPDH一抗的浓度,试试1:10000,20000另外二抗也可能会带出杂带,你可以做一个不加GAPDH一抗,其他均加入的对照。2、这个不能直接断定一抗有问题吧,先确定你的系统是稳定再考虑一抗问题。
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