实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问用 -70℃ 冰箱细胞冻存复苏成活率低的原因有哪些？

chinalip

1、细胞冻存于－70-80℃保存半年左右是没有问题的，关键是用于冻存的细胞首先状态要好，然后进行程序性降温，4度1h，-20度2h，后转移到-80度。当然也可以使用程序降温盒（提前拿出来解冻）。2、DMSO的浓度10%左右为最好。3、复苏和冻存的程序怎样才能达到最好效果？复苏和冻存的总的原则是慢冻速溶，复苏时预先打开水浴锅37度，将冻存细胞取出立即溶解，加入培养基后离心五分钟，重悬细胞后置于细胞培

3 回答5368 围观

问免疫组化一抗的选择要点和技巧是什么？

xtt123

要点：一抗二抗都是一种可以特异结合别的东西的基团，而且一抗可以至少结合两种其他基团（底物和二抗）

4 回答4135 围观

问复苏后第二代死亡是为什么？

yyygo

CHO细胞，做稳定转染，为何不加MTX筛选呢？这样不能保证细胞是单克隆啊，如果是细胞瞬时转染表达的话，瞬时快速不需压力筛选

3 回答1892 围观

问检测膜蛋白与另一蛋白相互作用，膜蛋白不表达？怎么解决？

dxymuchong

可以外转膜蛋白基因，再做co-IP啊，或者也可以做做IF（免疫荧光）看是否有共定位

1 回答2812 围观

问如果电泳中发现DNA几乎不移动，可能是什么原因？

王国的雪

可能是电泳缓冲液的PH值不对。每次应该用新配置的。或者电泳仪的电流太小了。

2 回答3036 围观

问酶切反应中添加酶的量应控制在什么范围，为什么？

yhh931229

为了防止出现星号活性，因为甘油浓度上升，酶量上升都有可能会出现星号活性。

2 回答4968 围观

问冻存细胞从 -80 转到液氮的运输有没有好的方法？

xxfn

没有，哪有这样，不会是这个影响，细胞培养中的其他问题吧应该是

3 回答3335 围观

问限制性内切酶进行酶切DNA实验时DNA必须是纯化的吗？

王国的雪

我觉得是必须的，如果DNA不纯，会影响酶切反应。

2 回答2848 围观

问RIPA 裂解细胞过程中体积逐渐变少怎么办？

zhangshm2005

加完裂解液就用刮刀刮下来吸到EP管里再放置在冰上，不要先放置再刮，不然就容易干

2 回答1599 围观

问半贴壁细胞做免疫荧光，该怎么处理呢？

jingle8713

收集细胞，用PBS洗涤，然后加入血清重悬。载玻片要用酒精泡，然后清水浸泡，烤干之后用多聚赖氨酸浸泡，烤干后，将细胞悬液涂在载玻片上面。室温晾干，待片子干了之后就可以继续往下走了，固定，通透等

3 回答3145 围观

问实验欲获得某一确定的质粒，请问接下来该如何做？

我是金博士

个人觉得实验目的是要获得质粒，那么将产品洗脱之后，还有电泳跑胶，然后切胶之后纯化，再转化到相应菌种里面去。

2 回答1017 围观

问LiCL wash buffer不溶

vickywanglan

应该是比较高浓度的licl遇到非离子刑去垢剂NP-40之后变浑浊了，我一般配置的时候是每种溶液都配置成母液（比如10% NP-40, 5M LiCL, 500mM EDTA等)，然后在将母液稀释成工作液的浓度，配的时候先加入水，然后再加其它成分，一般不会出现有沉淀的情况。

1 回答2722 围观

问细菌无氧环境

哈咕哈咕

有产气袋可以买来用，根据你对缺氧程度的需求选购。

1 回答1548 围观

问QPCR 时，取 DNA 的量应为多少？

dyyapple1985

做chip时，input 留做chromatin【预加抗体】的1/10，做q-PCR时，input 再1:10稀释，然后和抗体沉淀的DNA作对比

1 回答10020 围观

问细胞免疫荧光中 Alexa Fluor488 二抗在镜检中曝光时间是多少？

huangyusheng

好像300~800毫秒

1 回答1959 围观

问植物免疫沉淀酶切的疑问

1620 围观

问请问微管蛋白试剂盒是怎么使用的啊？谢谢！

962 围观

问请问稳定转染稳定细胞系统构建的过程是什么样的？

1759 围观

问分子生物学

我是金博士

这个你要查一下文献，一般会有破碎条件。然后摸索一下，就可以了。

1 回答1532 围观

问HO-8910 和术中取材的瘤细胞有什么区别？

云天昊

这个二者是不一样的，从DNA水平，患者身上获得的样本，不一定能稳定传代

1 回答935 围观

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