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        RNA抽提后出现奇怪情况

        相关实验:总 RNA 提取实验

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        九尾狐玉藻

        按步骤用50mg的小鼠肝脏提取总RNA,用预冷的研钵和-70度保存的trizol共研磨组织,氯仿分层,异丙醇沉淀,75%乙醇洗一遍,风干后depc水溶解沉淀,1.5%的琼脂糖电泳220V,20min,结果图如下,各位大神能帮我看看是什么情况吗?图片描述图片描述图片描述
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        18 个回答

        user-title

        dxy_yhp416a0

        有帮助
        Trizol提取鸡肝脏,用琼脂糖非变性胶电泳,会发现只有16S的条带(只能看到一条带),但是用甲醛变性胶电泳,28S和18S条带都在,和您这个情况有些类似。其实用Trizol提取没那么容易降解,况且你的5S RNA很亮(说明5S含量高),很完整(说明基本没有降解,如果28S已经降解到看不见的程度,那5S条带是不可能幸免的)。若怀疑试剂,提取流程或者电泳阶段发生降解,那随便找棵花花草草验证一下就可以
        user-title

        dxy_yhp416a0

        有帮助
        首先,5S条带比较完整,28S和18S条带虽然不能观察到完整的条带,但是没有明显的拖尾,条带两端可以观察到被染色,但是没有观察到拖尾,所以出现降解可能性不大。由于Trizol对肝糖原缺乏特定的清除能力,所以Trizol提取的肝脏RNA容易混杂多糖污染,电泳时就常出现您这种情况,尤其使用非变性胶做电泳检测。建议做一个甲醛变性胶电泳看看,通常电泳结果会改善很多。
        user-title

        mingwang23

        有帮助
        RNA有降解了,建议在操作过程中多注意RNA酶污染的问题!
        user-title

        木子枫叶

        有帮助
        75%的乙醇最好也用高压过的DEPC水配制
        user-title

        神马很给力

        有帮助
        主要考虑配胶的问题。胶没有充分混匀存在拖尾。RNA一般都会有降解。跑胶时间太长
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        SQLOVE

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        不同组织不同条件28S,18S,5S的比例不同,不能因5S亮就认为RNA降解了。但图中28S和18S跑出了很虚空心带,可能有一定降解。RNA在跑胶的过程中也会发生部分降解,最好缩短跑胶时间到10min,电压150V足够。
        user-title

        shgenwu

        有帮助
        同意楼上,应该跑MOPS缓冲液的甲醛变性电泳才能看到28s:18s约2:1,而且RNA也要预先变性出来,不是直接跑DNA胶。
        user-title

        远古的早晨

        有帮助
        暴露时间过长
        user-title

        ZhanLEE

        有帮助
        这个好像是RNase降解RNA的节奏,最好能把电泳槽以及加样的所有器具用DEPC水浸泡一遍取出RNase,效果应该会好一点。
        user-title

        猪猪侠女

        有帮助
        我之前也做出过这样的条带,感觉应该是降解了。跑胶的时间有点过长了
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        scrop_lamb

        有帮助
        尝试重新提取并定量
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        cljjj2000

        有帮助
        配胶的问题
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        DD_BB

        有帮助
        测OD值不是更直接?
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        风中怅惘

        有帮助
        我觉得主要问题不像是降解,降解肯定是有,但主要的问题是18S和28S的比例不对,应该是2倍关系,你这个看不大出来,降解的话会出现很明显的条带,5s太亮,另外貌似条带只有3条,不像是有杂质污染等(主要是DNA),可能的主要问题是操作中的丢失,建议严格操作步骤,低温离心,弃去上清液要注意,最后75%酒精处理要尽量在冰上风干,可以用枪头把多余的酒精引流出来,最后我觉得用1%的胶比较好,跑的时间短,降解的机会,程度都要小。
        user-title

        仰望天空xd

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        RNA降解了,建议在操作过程全程用喷壶喷洒75%酒精,最好一个人戴口罩独自操作,不让无干人员靠近,也不言语,尽量吸干75%酒精,不等风干,否则暴露在外的时间太长RNA会降解。另外,琼脂糖电泳所用的TAE最好现配先用 (包括电泳槽),电压建议是80V,15—20min
        user-title

        啊啊啊啊310

        有帮助
        有降解,注意操作吧
        user-title

        fengerer

        有帮助
        可能是RNA降解了!18s和28s条带很淡,5s条带很亮!
        user-title

        114558606zlm

        有帮助
        可能是提取的RNA含有杂质或不纯!
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