我要登录|
免费注册
|
我的丁香通
- 企业机构：
- 成为企业机构
- 个人用户：
- 个人中心
移动端

大家都在搜

0 人通过求购买到了急需的产品

免费发布求购

发布求购

实验问答

31,502,840 科研人在看

问ELISA检测时，如何排除其他抗体干扰？

丁香实验

就问题来讲我我认为是这样的体内的Ig的不同形式其实是存在在免疫的不同时期的，或者我们理解为半衰期不同。那么最后起到作用主要还是IgA，其他的都比较少。那么你想排除干扰，这个一般是在你产品的检测系统上下功夫。比如你二抗的特异性等。纯粹去除的，并且简单可行的我没遇见过。

1 回答696 围观

问切片染色后背景太深，不易区分特异性与非特异性着色？

丁香实验

a.也许是抗体本身有问题，因为有很多公司的抗体质量并不好，很容易上背景，可以换一种抗体试试。b.如果经费不允许换抗体的话，你可降低抗体的浓度，并随时注意观察显色，在能看到信号的情况下尽量降低背景。c.可以换一种封闭液，不同的封闭液对某种来源的抗体来说，会有不同的封闭效果。d.可以在一抗和二抗中加入一定比例的你所检测动物组织的正常血清，这样可以去除一部分非特异性染色。

1 回答808 围观

问免疫组化结果老是出现阴性结果？

丁香实验

免疫组化出现阴性结果有可能组织本身就没有信号，也有可能是抗体出了问题。你可以找一些阳性组织做一下，以确定是抗体的问题还是组织本身就没有所检测的抗原表达。还有，你可以提高抗体的浓度，或者试一试抗原修复等方法，也许会得到意想不到的结果。

1 回答866 围观

问内源性过氧化物酶的灭活时间和浓度是什么？

丁香实验

（1）一般3%过氧化氢灭活时间短点，可以10min左右；而0.3%过氧化氢则可以适当延长封闭时间，一般10~30min。（2）用甲醇配置过氧化氢比双蒸水或PBS可能好在保护抗原和固定组织作用，过氧化氢孵育时间过长易引起脱片.（3）现用现配，配好后4度避光保存。

1 回答866 围观

问在什么情况下进行组织抗原修复，抗原修复的条件是什么？

丁香实验

（1）由于组织中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定过程中，发生了蛋白之间交联及醛基的封闭作用，从而失去抗原性。通过抗原修复，使得细胞内抗原决定族重新暴露，提高抗原检测率。（2）修复方法从强到弱一般分为三种，高压修复、微波修复、胰酶修复。修复液也分为若干种（具体的可以查阅相关资料，大量的：中性的、高pH的等）。（3）微波修复，我们一般用6min*4次，效果不错。

1 回答1670 围观

问DAB显色时间如何把握？

丁香实验

（1）DAB显色时间不是固定的，主要由显微镜下控制显色时间，到出现浅棕色本底时即可冲洗；（2）DAB显色时间很短（如几秒或几十秒）就出现很深的棕褐色，这很可能说明你的抗体浓度过高或抗体孵育时间过长，需要下调抗体浓度或缩短你的抗体孵育时间；（3）此外，若很短时间就出现背景很深，还有可能你前面的封闭非特异性蛋白不全，需要延长封闭时间；（4）DAB显色时间很长（如超过十几分钟）才出现阳性染色，一方面可能

1 回答1661 围观

问流式中检测细胞表面和细胞内蛋白表达水平的抗体有何区别？

丁香实验

1 回答789 围观

问流式细胞仪检测细胞周期是否需要鸡红细胞作参照？

丁香实验

不用，标准微球做完laser alignment（光路校正）就可以了。尽量把微球的各色CV值控制在1.5以内。

1 回答675 围观

问流式与werstern的区别？

丁香实验

（1）Western 是检测蛋白表达的金标准，可用于检测细胞多种类型的蛋白；流式细胞术的方法多用于检测细胞膜蛋白，虽然也可通过Triton-X100给细胞打孔的方法来检测胞内蛋白，但对于分泌蛋白却是无能为力的；（2）Western测蛋白含量对抗体的量需要很少，一般1：1000左右，而流式对抗体的需要量很大，一般1：50（很浪费抗体）；（3）采用Western方法检测细胞蛋白含量的变化一般要有内参，

1 回答1189 围观

问流式中检测细胞表面和细胞内蛋白表达水平的抗体有何区别？

丁香实验

抗体只是针对相应抗原的，至于是针对胞内还是胞膜对你检测来说并无明显影响，你只需要查清楚到底是针对哪一个部位的抗原的，应该是可以用同一种抗体进行检测的，在流式操作时只需注意：如果是针对胞内，则需要加破膜剂，让抗体能和相应抗原接触，否则就不需要了。

1 回答560 围观

问流式同型对照怎样选择？

丁香实验

同型对照：是指与MoAb相同的、未免疫小鼠的免疫球蛋白亚类，若使用直接免疫荧光染色法，同型对照也应标记荧光色素，如IgG1 FITC、IgG2ａ、PE等。主要考虑了细胞的自发荧光、FC受体介导的抗体结合和非特异性抗体结合等影响因素。此外，同型对照与MoAb所标记的荧光色素、浓度、F：P比值（标记的荧光色素与免疫球蛋白分子的比值）应该相同为最佳，这对准确设定阴性与阳性细胞的界标有重要意义，切忌使用与

2 回答1114 围观

问最近细胞总是复苏失败，是什么原因？

shijunwen2007

细胞冻存和复苏的原则是慢冻快融，只要按着这个标准去做，一般细胞都不会受太大的损伤。你说细胞细胞在冻存后复苏一开始成活率还好，最近复苏不成功，考虑是冻存后保存的原因，是-80度还是液氮保？-80度保存是否由于经常开启导致温度经常波动？温度的经常性波动致使冻存细胞受到损伤，所以复苏不成功。

10 回答9929 围观

问中杉金桥的二步法免疫组化试剂盒要不要加封闭？液

boborsky

两步法不用加吧，我是用的dako的envision两步法，不用加血清封闭的。

9 回答12279 围观

问请问50xPIC是什么呀？

1 回答2332 围观

问为什么 IP 样品条带位置总和 Input 条带位置不一致？

1 回答6561 围观

问石蜡切片制作时为什么切片组织总是有横向裂纹？

mumaren640830

1.切片机刀片不快。2.温度高

9 回答11901 围观

问用冻存的肾脏组织提取蛋白，加上裂解液裂解，上清液为红色的，能不能继续往下做呢？

2440 围观

问神经胶质细胞经摇床振摇纯化18h，星形胶质细胞没了

新叶FJ31

请问一下你的分离步骤

1 回答1594 围观

问CRISPR 构建点突变细胞系是杂合突变好还是纯合好？

dxy_g1lhlo40

这个不用纠结，你构建细胞系的时候，杂合子和纯合突变单克隆都是有一定概率能获得的，到时候你做实验的时候都保留，进行对比。这样实验数据就更有说服性

1 回答5348 围观

问细胞污染

raulw2003

大家都说了很多方法了，我记得去以前带的师妹做细胞老是污染，后来我看她操作的时候发现她的手上戴了手链，去掉手链后就没有再污染了。你可以注意一下。

29 回答13340 围观

关于丁香通

公司信息

个人用户

企业机构

无忧采购轻松科研

提问

扫一扫

领取干货资料

反馈

TOP

打开小程序