蛋白没有表达是啥原因？
大明天桃子
我最近表达一个大约850 bp左右的目的片段，载体是改造过的pET-28a(+)，重组质粒经双酶切和测序确定，采用BL21菌株作表达，并用空质粒转化菌和未转化的BL21做空白对照。培养菌液至OD值0.8-1.0，加入1 mM IPTG诱导，37摄氏度继续培养，分别于诱导后0小时，1小时，2小时，3小时收集菌液，SDS-PAGE发现未有蛋白表达。到底问题出在哪里？
2 个回答
冰妮儿BPTE
有帮助
我和你差不多的，我的基因是1100bp左右，一开始用bl21(de3)也不表达，重复多次。现转到transetta感受态细胞中，并且做了梯度iptg诱导，把包涵体蛋白上清蛋白还有收集菌体留下的lb都点样，也没有目的蛋白。因为我的基因是合成的，我现在都要怀疑这个非天然基因片段到底能不能表达了。只能再进一步查找原因
大爱蒙奇奇
有帮助
蛋白不表达可能有很多方面的原因：
1：质粒是否成功转化到你的宿主菌。
2：改变诱导时机和诱导剂浓度，一般当OD值在0.5-0.6时较好。
3：也许蛋白已经表达，只是不是已可溶形式表达的。
4：也许是蛋白表达过低，SDS-PAGE不能发现。
5：你用的菌错了，要用BL21(DE3).PET22b也的用这个菌。
具体的你还得分析，我也不是很了解。
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