实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问WB 敷牛奶需要多长时间？

wangyx520

一般采用 5% 牛奶封闭，可以 4° 封闭过夜，也可以室温封闭 1-2 小时。我都试过，没啥区别。

40 回答27325 围观

问荧光定量的 CT 值有正常范围吗？

张法丽

一般在15-35左右，如果数值再大，可能这个基因的拷贝数太低了，表达量太少

12 回答12083 围观

问溶解曲线代表什么意思？

alaling

熔解曲线(Dissociation curve)：随温度升高DNA的双螺旋结构降解程度的曲线。总的DNA双螺旋结构降解一半的温度称为熔解温度（Tm），不同序列的DNA，Tm值不同。DNA中G－C含量越高，Tm值越高，成正比关系（摘自搜搜百科）。白话说来就是因为其中有非特异产物，包含两种以上的DNA序列，所以才有两个峰。当然不排除极度偶然的情况：1.两个序列的熔解曲线一样2.没有目标产物，只有一种非

8 回答22759 围观

问细胞及组织标本的要求有什么？

鱼doctor

4%的多聚甲醛固定，不需要无菌，组织块大小最好是undefinedundefined0.15cm

4 回答7987 围观

问Chip 实验最后的 PCR 需要注意什么问题？

lh19840703

1. Chip 实验最后免疫沉淀后得到的模板用酚：氯仿或者PCR纯化试剂盒提取都行的，但浓度一般都不会太高，通常在十几到几十ng/uL之间，因为浓度太低，所以纯度（吸光值260:280）也不能准确地测取。最重要的是阳性对照要能在PCR后检查到明显的条带。2. PCR引物设计一般退火温度要相近，分别位于基因组上靶序列上下游各50~150bp左右，最好使靶序列位于PCR产物链的中间位置。正如上面这位同

2 回答6613 围观

问为什么 IPTG 诱导蛋白表达时没有目的蛋白表达？

我是金博士

这种情况就比较背。一个是可以调整IPTG浓度再试试。要么就是再换个重组子。测序对，不表达，这种情况也蛮多的。

1 回答3045 围观

问q-PCR有非特异性条带有没有办法在设计引物的时候提高特异性？

健坤免疫组化

现在常用的引物有染料法（sybr green 1）和探针法（taq man探针），taq man探针的特异性非常，但是价格要贵一些，而sybr green 1价格比较便宜，但是会有非特异性扩增，建议试试taq man探针，详细还可参考：http://www.biomart.cn/infosupply/27646868.htm

8 回答2877 围观

问TUNEL 法检测细胞凋亡可以直接在孔板上做吗？

fly620

做成细胞爬片后，染色，避光孵育会比较方便，六孔板中的细胞不能用油镜观察。

6 回答4304 围观

问WB 条带缺失？还是杂带多余？

2536 围观

问请问划痕实验应该何时加入药物处理条件？

2359 围观

问细胞培养为什么会出现黑胶虫（第一次遇到）？

1736 围观

问WB 条带白色，背景脏是怎么回事？

5456 围观

问通用引物 ITS4 扩增植物 DNA，为什么一直扩增不出来？

987 围观

问能够扩出目的条带但是特别弱是为什么呀？

601 围观

问抗体选择问题

2128 围观

问大分子量蛋白该怎么跑呀

2735 围观

问转膜总是不成功，检测不出蛋白怎么办

1533 围观

问动物实验 WB 标本数量如何选择？为什么？

2500 围观

问划痕实验

1905 围观

问PCR有产物但是电泳无结果是为什么？

alaling

1，marker和引物有条带，说明在跑胶的环节应该没什么问题 2.内参和目的条带均没有，说明很大可能是在跑PCR的环节出现问题，就是没有P出东西。应该在PCR的环节找问题 3.你说电泳无目的片段的条带，是指有其它非特异条带还是根本就没有条带？如果可以，放上图是最好的，大家都可以一目了然，比这里做排除法强的多

10 回答10178 围观

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