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实验问答

27,511,641 科研人在看

问CD25磁珠分选纯度很低的原因，如何处理？

莹啊免疫啊

可能是磁珠的特异性不够或者量不够，或者是你是两个一起分选的还是分步分选的，一起分选的话，CD4+本身可能就带了一些25+和25-导致结果不好？个人推荐可以试试流式分选，多重筛选还挺省事的。

9 回答1155 围观

问磁珠分选和流式分选的问题

dxy_29k93ve4

磁珠分选一般是细胞数比较多，如果流式分选时间会很长，磁珠分选可以较短时间拿到比较多的细胞；流式分选会时间相对较长，同时分选过程会给液滴加电，以及如果液体打到收集管侧壁都会对细胞造成损伤，但是可以同时多标进行分选，磁珠分选就做不到

9 回答1321 围观

问流式细胞仪检测细胞凋亡结果分析问题

莹啊免疫啊

感觉分群分的不太好，至少得重复三遍才行，试试看第二遍时候会不会好一点。

7 回答2819 围观

问如何有效提升特异性荧光染色的方法？

lyang556

用石蜡包埋，然后切片尽量切薄（3μm），可使细胞轮廓清晰。用0.1%硼氢化钠室温处理20分钟，然后0.5%苏丹黑室温处理3分钟，以降低自发荧光。

15 回答677 围观

问实验OD值偏差问题，想知道哪里出错误了

颜渊溪桥

首先前提是标准曲线做的没有问题，那么第二次的样品需要稀释后检测呢，是否样品中的本来前胶原含量就比较多。

9 回答598 围观

问请问elisa实验中，空白、阳性对照、阴性对照均显色，可能是什么原因？

sfnana

您好，楼主，请问你的问题解决了吗？我现在也是出现了跟你一样的问题，阴性，空白值都很高。（我做的是双抗体夹心，biotin标记的抗体 1：1000 100uL/孔，亲和素1：5000）样本（O.D.450 nm）阴性（O.D.450 nm）空白（O.D.450 nm） 2.5310

6 回答2072 围观

问细胞免疫荧光探讨

旅途中的搬运工

我最近也在做，做了好几次甩片了，准备试试在流式管或者EP管里面固定加染色了，做完最后一步再甩片了。甩片完了在固定，细胞形态会改变，结构可能也完整

4 回答1656 围观

问流式细胞技术测定细胞内游离钙浓度为何要使用氯化钙？

LM0309w

1、流式细胞仪上的FL2-W FL2-A FL2-H 分别是做什么的？FL2-W是只检测荧光的脉冲宽度， FL2-H是指脉冲高度。通常在做细胞周期分析时应用，用于去除粘连细胞。2、流式同型对照怎样选择？同型对照（IsotypeControl）：使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白，用于消除由于抗体非特异性结合到细胞表面而产生的背景染色。如果一抗是多抗，可以

9 回答467 围观

问DNA、mRNA和蛋白质–这是一个悲伤的故事

7月未央

哭着哭着，蛋白就水解了。（= =|||||||||||||||||）DNA终于又转录了一个mRNA。DNA说：“你好，我是你的模板。”mRNA说：“你好，我是mRNA。”DNA仔细地看着mRNA：“你和他，真是一模一样。”mRNA：“谁？”DNA：“我上一次转录的mRNA。”停了停，又说：“你们明明是一样的，为什么我还在想念他呢？”说完，DNA慢慢合上了眼睛（…）。如果相遇的尽头注定是错过，是不是

2 回答710 围观

问DNA琼脂糖凝胶电泳关于上样的问题

mpark

For DNA with size less than 150 bp, try to run native PAGE, DNA over 200 bp, try to run 2% agarose gel (60V for 30 minutes). If you want to run 4% agarose, try to use low melting temperature agarose i

4 回答2749 围观

问PCR扩增不出DNA

我的头痛不再痛

1、其实产物和marker比起来大小上有点偏差是很正常的，包括蛋白在内的分子标量，有时候不是那么准确，这个不必担心，只要差别不是很大就可以。完全可以通过测序去验证。2、之前能扩增出来，后来就扩增不出来，相同的扩增条件和体系，那是否就是模板的问题呢？比如你使用了新的模板，这样就有可能是你模板的质量或浓度问题。

2 回答985 围观

问咨询一下关于质粒的问题

realtimes

OD测定没有电泳准，电泳可见即所得，OD有不一定有质粒

3 回答573 围观

问DNA的分子量估算

ajun333333

核酸、核苷酸的基本换算1．核酸的换算：(1)摩尔数与质量：1 μg 1,000bp DNA = 1.52 pmol1 μg pUC18/19 DNA (2,688bp) = 0.57 pmol1 μg pBR322 DNA (4,361bp) = 0.35 pmol1 μg SV40 DNA (5,243bp) = 0.29 pmol1 μg FX174 DNA (5,386bp) = 0.28

1 回答950 围观

问培养液分泌蛋白质谱前处理

青木书生

非标，具体原理你可以去看看我之前的帖子。你这个实验，前期定量在这个实验里面非常重要，毕竟全蛋白如果TIC差距过大，normalization还有个内参蛋白参考。建议送样前跑胶定量。DTT，IAA的母液可以使用10mM-50mM的NH4HCO3溶液，也可以用水配母液。具体工作浓度varies a lot by studios,自查JPR或者MCP文章。IAA注意避光配置，避光孵育，不宜反应时间过长。

2 回答1001 围观

问【求助】泛素化出不来！

卡戎3521

反过来拉，用ha抗体做诱饵蛋白，fkag显色。。我开始就是转myc/his-Ub质粒跟Flag-A蛋白的质粒，使用Flag做诱饵蛋白，但是每次都搞不出来。。后来看了很多文献，有的就是用Ni直接拉His这种方法，我用类似的His抗体做，成功率就还可以，目的蛋白的上方有多个条带，对照里面就没有~~

2 回答2977 围观

问一个质谱结果想请教大家如何分析

黑糊糊2000

这结果应该是PD sequest search result。我们从来不用score。都是PSM vaule. 你的结果是IP 那应该和negative control 比。但是你要注意low psm 不代表这个就是 false positive. 因为这个ＰＳＭ和蛋白长度也相关所以低PSM 不见的就不好。IP 的结果一般你的bait 会有最高的PSM 有时候也会是heatshock 或者 ri

1 回答933 围观

问求PCR结果怎么做出这样的散点图

seuzsl

先求每个样本的2的-Δct，然后所有结果除以对照的均值，就可以作图了

1 回答2042 围观

问qPCR各样本间内参差值控制在多少才合适呢？

seuzsl

理论上讲不同样本内参Ct值的差异并不影响结果解释，因为对于同一个样本而言，目的基因ct-内参ct应该是一个常数，而在提取RNA时，取样量（即，细胞数）存在差异会导致得到的RNA总量有差异，即便通过细胞计数取了等量的细胞，提取时RNA的得率也不同，即便取了相同质量的RNA进行逆转录，不同样本间降解程度、其它rna表达水平都可能会导致内参ct存在差异（当然这种差异不应该很大），这就是为啥一定要做内参，

2 回答16850 围观

问如何进行QPCR中多组数据的统计分析？

香柏树001

相对表达量，我用的是2-△△CT法，每组3各平行要有的，然后得出的Ct值，计算出2-△△CT值就可以了，这样就得出3各2-△△CT，要比较的两组之间求P值就行了。附件讲的比较详细。

1 回答974 围观

问为什么目的基因Ct值正常，反而内参的Ct值很高

杜小涛

引物反复冻融次数多了就有可能降解，不过你这个可以先考虑基因时空表达的问题，如果确定你做的这个时期和组织确定表达量并不低，就有可能是引物反复冻融导致的降解了

3 回答1151 围观

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