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        用免疫荧光的方法检测 LC3 可以么?怎么计算?

        相关实验:免疫荧光技术

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        丁香实验

        为什么大家都用 GFP-LC3 去转染细胞,可是这样应该是外源性的表达啊,真的能反应细胞本身的自噬状态吗?为什么没有人用免疫荧光的方法检测 LC3 呢,而且免疫荧光的方法自认为好像比转染要容易些吧,特别是 LAMP 与 LC3 共定位的时候,免疫荧光是必然能用到的实验方法,所以为什么一定要转染呢?用免疫荧光的方法检测细胞的 LC3 怎样计算?

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        7 个回答

        user-title

        西柚味的芋圆

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        免疫荧光染的是会同时染LC3I 和II 的,这种方法也没问题,在正常细胞和受刺激的细胞中都会有LC3的光点,二者的区别是受刺激的成团块状,正常的呈散点状。。。在一些可能会影响LC3的翻译的条件下,可能受刺激的细胞表现为光点也会变多,这个好理解。。。而在自噬基础水平比较低的状态,给了刺激可能也看不出太大区别时可以考虑转染,相当于给个放大镜,放大这一过程。
        user-title

        sk1981521

        有帮助
        转染LC3是检测外源性的自噬,正常也需要做内源性LC3检测,免疫荧光比值可通过显微镜配套软件计算
        user-title

        颜渊溪桥

        有帮助
        染内源的蛋白经常出现非特异的点,而自噬发生时就是看lc3聚集成点的情况,没有自噬时lc3是弥散分布在核内外的,过表达gfp_lc3是比较经典的检测自噬的方法,只要做好对照,结果非常可信。检测的方法就是看它成特异的点的情况。
        user-title

        txs900416

        有帮助
        免疫荧光直接检测LC3的话,是总的LC3吧,也就是说包含了LC3I和II,并不能说明LC3-II表达多吧,而转染GFP-LC3应该是直接定位于自噬体膜了,也就是能检测LC3-II,可以体现自噬流聚集的过程。此外LC3II表达本来就低,虽然转染是间接方法,但可以轻易反映出lc3的变化,直接免疫荧光可能由于本底影响看不太出来
        user-title

        Timy最爱柠檬水

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        可以,免疫荧光检测LC3,一般检测LC3-II,观察细胞中LC3-II的斑点形成。
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        dxy_0mxazdaw

        有帮助
        是可以用免疫荧光的方法的,但是最好将LC3固定一下,这样防止降解。
        user-title

        CXCR3

        有帮助
        用GFP-LC3的方法检测优点 可以很方便的用流式去检测,这样计算荧光强度还是比较准确的。
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