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磁珠分离时出现堵柱现象怎么办？

相关实验：肿瘤干细胞的分离纯化

丁香实验

2021-10-29

我用美天尼公司的CD34磁珠分离人脐血中的造血干细胞，开始做了几次都很顺利。可是是最近连续三次实验我遇到了一个令人头疼的问题，就是过MS柱的时候出现柱子堵住，液体无法流下来的现象。我的操作步骤是这样的：先将MS柱放到磁架上，加入500ulBuffer，在液体流完之前加入细胞悬液，这都还顺利，但是再加入500ul Buffer洗柱时，液体滴下来的速度就越来越慢，加入的500ul Buffer还没有滴完，柱子就好像被堵住了一样，液体滴不下了了，无法完成后面两次洗柱。我只能将残余的Buffer冲出来，再过一个新的MS柱。开始我怀疑是不是Buffer配的时间太长了，于是又重配了Buffer。今天，我又做了一次，可还是出现了堵柱的现象。如果每次都得用两个柱子，那老板要批我了。我以前做磁珠分选时都没有遇到过这种现象，可是最近三次连续出现堵柱，到底会是什么原因呢？不知道有没有其他战友曾遇到过类似问题，有什么解决方法呢？我现在十分困惑，还请大家赐教，不胜感激！

22 个回答

dxy_29k93ve4

2021-11-05

有帮助

可能是细胞悬液渣渣比较多所以把柱子堵了，可以试试两层200目滤网过一遍细胞，或者还有那种细胞筛滤一遍细胞悬液

微尘IABI

2021-11-01

有帮助

做磁珠分选之前一定要细胞计数，细胞量太大容易堵。泡沫太多容易堵。做细胞分选之前还需要进行管子的润洗

莹啊免疫啊

2021-11-01

有帮助

控制细胞浓度，提前拿滤网滤过一下，如果细胞太多，剩下的细胞等待太久，滤过的细胞也要好好重悬再加入到柱子里

大可S51D

2021-11-01

有帮助

不仅样品要过滤，buffer也最好用0.45um的滤膜过滤一下

来口芝麻薄脆吗

2021-11-01

有帮助

柱子使用时间久了会造成堵塞的情况，重复使用会有很多死细胞残留；换新的柱子依然滴不下来的原因又可能是buffer或者实验条件的问题，导致细胞在分选之前已经死了大部分，导致堵塞，可以换buffer 全程保持在冰上操作。

peaceful13

2021-11-01

有帮助

细胞悬液制备的时候尽量不产生气泡～另外细胞数的计数问题检查看看～是不是细胞浓度调节有问题～再者过柱前一定要过一下滤网

dxy_0mxazdaw

2021-11-01

有帮助

过柱子之前将细胞过一遍白布，确保单细胞悬液没有结块，柱子先用MACS液润洗3遍，如果这种情况下还是会有堵的现象，建议更换柱子，因为持续找问题会使细胞状态非常不好！

zgx3876

2021-11-01

有帮助

磁珠堵柱基本是样本的问题，样本聚团的缘故。因此解决方法也就是从样本处理的角度出发。最重要原因的就是样本细胞结块，一般过一下40 um滤网。另外体系去除气泡，比如缓冲液做脱气处理

半两月光

2021-11-01

有帮助

首先。一定要过200目滤网；其次，可以稀释上样浓度；算一下细胞数，是不是超过MS的容量

小破孩YG6Z

2021-11-01

有帮助

首先在细胞悬液制备上，一定尽量制备成单细胞悬液，在制备时可以使用一些酶使细胞团块降解（DNA酶、胰酶等），充分混悬细胞，打散团块；在加细胞悬液时，将滴管伸至管底加，不要沿着管壁加，未洗净容易堵；细胞悬液的量也要控制好；一个柱子处理后可重复用几次，可以询问厂家具体处理方法，实在不行，就只能询问厂家换个柱子