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        组织免疫荧光失败问题

        相关实验:免疫荧光技术

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        丁香实验

        以前自己染的人体组织步骤没问题,一抗测试过是没问题的,DAPI没问题,种属结合没问题。这次染色红色荧光下产生许多散在亮点(没有预期的目的荧光),这次亮点还是特异的(与绿色荧光对比过)~个人怀疑是否二抗出了问题(-18°避光放了一年了)这种散在亮点又没有目的表达的原因是什么?

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        8 个回答

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        西柚味的芋圆

        有帮助
        可能是二抗保存不放。这种散在的光点就要看你的洗液了,最后一步封片之前要用去离子水而不是pbs洗,这些非特异性的光点可能是离子染色导致的
        user-title

        lyang556

        有帮助
        可能是二抗的问题,一是储存时间长可能被污染,二要看看是否失效。
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        CXCR3

        有帮助
        需要考虑一下洗抗体过程是否彻底,片子上非特异性的标记可能和二抗失效有关。
        user-title

        txs900416

        有帮助
        主要是需要考虑两个抗体的问题,一抗是否过期,二抗是否污染,此外也要注意封闭做好了没
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        咸水鱼rain

        有帮助
        可能是二抗的问题,那就使用没有问题的二抗做一个阳性对照
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        peaceful13

        有帮助
        很有可能抗体放置时间久了,荧光二抗的聚集物所产生的现象,将抗体离心,取上清染色试试看
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        颜渊溪桥

        有帮助
        考虑样本是否没有做好封闭,另外是否二抗污染了。
        user-title

        dxy_0mxazdaw

        有帮助
        如果一抗没问题,应该就是二抗不好用,可以适当增加二抗浓度和染色时间,或者重新调整共聚焦参数,也可能是激光强度不够。
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