实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问流式细胞周期结果没有S期，是什么原因

笑嘎嘎

如图：

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问流式细胞仪跑出的图流式细胞图分群不明显怎么办？

Ethan2007

又仔细查了下资料，分群不明显还有可能是抗体的荧光强度较弱，可选用强荧光的抗体。另外，在染色时，抗体的加入量不合适也可能造成分群不明显。可以考虑做一个浓度梯度，以找到合适的抗体浓度。

3 回答7512 围观

问流式细胞术检测GFP转染的效率相关问题

amethyst2003

一般的话流式检测的细胞数是10000－20000，具体看参数设置了，建议用PBS重悬，一般是不需要固定的，检测所用为第一通道，单色荧光不难的，做一次就知道了。好运哦

1 回答1022 围观

问条带宽度不一样目标蛋白性状奇怪并且拖尾严重的原因

dxyhsx123

上样的孔径是否均一，浓缩胶和分离胶比例是否合适，是否混匀，有无气泡，跑胶电压和速度等方面调整。

35 回答2832 围观

问用于反转录PCR的RNA浓度范围是？

xiadongliang

反转录问题应该不大，1ug的RNA template实在是太多了。去哪儿弄那么多做反转录啊。可能是你设计的引物不太好，扩增存在非特异性条带。

1 回答1431 围观

问提取RNA后反转录跑PCR电泳阳性对照没有条带？

水行船

阳性对照是什么，整个实验流程描述一下，信息太少了题主：阳性对照是FLAG ，DSP但是一条带都没有，是不是我提RNA，或者是反转录哪里出问题了，求解。

2 回答669 围观

问如何选择反转录PCR的内参？

cloud-clone

你的内参选择稳定是兔抗鸡GAPDH或B-ACTIN的抗体了。内参抗体实质就是一个一抗。

2 回答760 围观

问如何快速定位污染的方法？

丁香实验

靠近风口的位置，还有就是有水的地方永远是首要排除的位置。重点怀疑水浴锅和培养箱内的水盘是不是有细菌/霉菌滋生。还是要事先做好细胞实验室布局设计，优化和规范细胞操作流程，提前查缺补漏，才不至于发生污染后，无从下手找到原因。

1 回答453 围观

问细胞培养背景发现移动的小点，是细胞污染？

SJ多可爱

有可能是细菌污染吧？后期培养液浑浊了吗？题主：没有浑浊，现在查了很多，还是怀疑黑胶虫污染，使用了黑胶虫清除剂好了很多使用黑胶冲清除剂后期还能见到会动的小黑点吗？题主：会少些，一旦停用就又会有我养的时候，细胞密度长到接近百分之90的时候，就基本上很少见到黑点，不影响细胞状态，没啥问题，细胞增殖没有问题，形态也没有问题，不必太在意这个黑点的，我见过好多养细胞都有这种会动的黑点，细胞生长不受影响，

2 回答1041 围观

问细胞污染及解决方法

yj1984ren

这两张图到处都有了，结合楼主提到的细沙样，就要考虑细菌污染了。

3 回答786 围观

问实验动物饲养密度

soso2007

我一般按照标准一个笼子里养3只，笼子大约是4undefined5undefined40，具体我也没有量过。而一个房间可以养多少只，这个就不知道啦。

3 回答1233 围观

问细菌培养问题

雕刻者

液体培养基和摇床应该都没有问题，因为我准备感受态（同样菌株）时就是用同样的液体培养基（就是不加AMP）和摇床的，感受态细菌长得很好，还有我做了阴性对照，没长细菌。这些问题我以前也考虑过。LB-AMP固体转到LB-AMP液体中的细菌主要问题是细菌生长不良，我现在用固体平板上转种2－3代（挑取生长较快的较大的菌落）后最后挑取较多的细菌转种到液体培养基中，液体培养基中的生长的细菌量增加了。但是液体培养基

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问请教细菌培养是否污染？

鱼小

我的判断是：1、没有染菌。2、同一条链上大小不一很正常，我很多实验都是这样。这个和菌种、生长时间等都有关的。3、那些非常小的应该是刚分裂出来的。4、枯草杆菌一般都不是成链状的，不过我有几次摇瓶出来染色后也成链状。5、真的感觉没有染菌，可以做做16s rna鉴定！

3 回答658 围观

问直接提取DNA的电泳图发现有两条带，且与目标大小不一致

猪美美的小蘑菇

你的marker是多大的，如果marker使用没有错误的话，下面两条带看着像引物二聚体

2 回答987 围观

问曝光后膜全黑，不知道是什么原因？

此用户已注销

问题已经解决了，是一抗和二抗浓度过高了

2 回答1704 围观

问做出来的有差异表达的蛋白，又做了一批用WB的无差异？

Du杜杜杜

p 0.03，这个值很大的了，假阳性率很高，一般至少都是p＜0.05.蛋白质组学是一个非靶向的实验，并不是一个靶向实验，所以有假阳性的结果是很正常的，即使验证也是选取的P值较小的，且FC值变化较大的。

2 回答711 围观

问小鼠心脏采血要麻醉吗，能采多少？

丁香实验

用1ml一次性注射器先抽取血液，再转入含有肝素的取血管中即可，此操作过程没有发生凝血现象。但产生了严重的溶血，不知其原因，望不吝赐教。

1 回答895 围观

问想分离支原体不知如何选择培养基？

丁香实验

利用葡萄糖的支原体：肺炎支原体----支原体肉汤培养基；利用精氨酸的支原体：口腔支原体、唾液支原体、人型支原体----精氨酸支原体肉汤培养基；利用尿素的支原体：T 株支原体 (解脲支原体)—--解脲支原体培养基鸡毒支原体------改良 Frey 培养基用于固体培养时：以上支原体都可以接种于支原体琼脂培养基上。

1 回答816 围观

问免疫共沉淀coip的对照问题

晓柒SQJZ

从您的这个结果来看，蛋白A的检测系统没有work，检查Anti-A抗体的用途，是否是WB，IP通用的抗体，有些抗体只能识别线性表位或只能识别空间表位

2 回答778 围观

问免疫共沉淀中珠子预吸附和IgG的问题

丁香实验

你这边所说的非特异性蛋白大致可以理解为能够与protein A琼脂糖珠结合的蛋白；包括能与protein A结合蛋白和与agrose结合的蛋白。这样做毫无疑问会降低非特异结合，但是也要考虑到这一步的局限性：1、是有可能把目的蛋白拉下来的，因为有些蛋白确实会跟proteinA结合，你恰好是做这这样的蛋白就有可能出现这个情况。2、这种方法也没办法把所有非特异结合蛋白去除，所以也不用担心把你的目的蛋白拉

1 回答218 围观

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