实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

全部

细胞

问核质分离定位和 confocol 定位哪个可信度更高？

huarenqiang5

在其他条件相同的情况下核质分离定位的可信度要高些。

3 回答599 围观

问GST tag的特异性高吗？

于小鱼鱼1998

提高gst目的蛋白的浓度，二者存在竞争关系，提高浓度就可以提高竞争力

3 回答319 围观

问SYBR GReen I和PI染色显微镜制片详细操作过程

loveliufudan

SYBR Green染色是一种常用的核酸荧光染色方法,与HE染色不同,它通过与双链DNA特异性结合来探测细胞中的DNA。SYBR Green染色细胞制片的详细操作流程如下:1. 取待检细胞,制备细胞爬片,固定于载玻片上。常用4%多聚甲醛固定10-15分钟。2. 用PBS缓冲液洗涤2次,每次5分钟。3. 在无光条件下,加入适量含有SYBR Green 的染色液(商品SYBR Green可直接稀释使用

4 回答1968 围观

问血球计数板计数细胞为什么那个格子这么模糊是我操作方法不对吗还是本来就是这么模糊

huarenqiang5

主要考虑以下几点:1.染液保存时间过长。2.操作不当。3.细胞原因导致。

6 回答2408 围观

问提取组织线粒体做western

土井挞克树

操作步骤：1.提取线粒体后，蛋白定量，与线粒体保存介质（主要成分蔗糖、Tris）混匀-20度冻存。2.将分装线粒体取出融化后，加上样缓冲液混匀。3.100度水浴5分钟，取出立即置于冰上。上样，每孔150微克蛋白。4.5%浓缩胶，80伏电压，12%分离胶，110伏电压跑电泳。

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问Percoll从肾脏组织中分离免疫细胞，什么比例和离心速度合适？

sswei

整个梯度离心要求慢升慢降，需要在离心机里设置加速度，一般有 1 到 9 级可选。Percoll 升降都要 3 的加速度。从1.02-1.3 g/ml范围内的密度梯度离心分离

5 回答896 围观

问尼氏染色的为什么会花片，像是有水渍或者没染匀

dxy_uvsexwc5

有可能是组织取出以后固定慢了。

5 回答379 围观

问用乙醇回流提取和超声提取过滤后都要进行冻干才能上液相嘛

sswei

用乙醇回流提取和超声提取过滤后都要进行冻干才能上液相

5 回答268 围观

问大家跑过pmd19-t的载体吗，其中有一个control片段，我连接后直接跑凝胶，为啥那么歪歪扭扭，而且位置不对（第二泳道）

loveliufudan

PMD19-T载体中的Control片段可能跑凝胶时位置不正常的原因包括:1. 控制DNA片段质量不好。可能在提取、储存过程中降解或污染,导致其在凝胶电泳中迁移位置不正常。2. DNA上样量不准确。上样量过多会使DNA在凝胶中迁移变形。应准确计量上样量。3. 凝胶浓度不适合。如果凝胶浓度过低,DNA片段易于变形。应选用适合DNA大小的凝胶浓度。4. 电泳电压设置不当。电压过高会产生过热,影响DNA

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问玻璃培养皿灭菌的标准操作是什么

此用户已注销

1培养皿洗净后应烘干或晾干，之后按每5-7套用牛皮纸或报纸包好，也可装载大饭盒或特制的盒内，即可进行灭菌。2/6移液管洗净后也应烘干或晾干，在口吸的一端用尖头慑子或针塞人少许脱脂棉花，以防菌体吸人口中或口中的微生物吹人吸管而进人培养基内造成污染。3/6塞棉花要适量（长约1cm，松紧适度），塞好后用酒精灯火焰将外露在管口的棉花烧除，然后用4-5cm的报纸条，以45°角螺旋形将每根移液管分别卷好（需

3 回答953 围观

问UV造模的时候，细胞需要将完全培养基换成无血清培养基或pbs吗，对照需要换吗，照射完是否需要放到培养箱继续培养24h后再测活力。

loveliufudan

对,制作细胞模型时,通常需要将完全培养基更换为无血清培养基或PBS,以减少营养因子的影响。对照组也需要进行相同的操作,以保证实验条件一致。照射后,最好将细胞继续培养24小时,然后再进行活力测定实验。具体操作步骤如下:1. 将细胞以适当密度接种在带有完全培养基的培养皿或培养瓶中,培养过夜。2. 当细胞融合度达到70-80%时,吸掉完全培养基,用PBS轻轻洗涤2-3次。3. 在对照组和实验组中分别加入

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问1-2mmol/L的薄片是什么意思呢

loveliufudan

举例来说:1. 如果是1-2mmol/L的钠离子溶液,表示在1升这个溶液中,包含1-2毫摩尔的钠离子。2. 如果是1-2mmol/L的蛋白质凝胶薄片,表示在制备这个凝胶薄片时,使用的蛋白质样品的浓度在1-2mmol/L。3. 如果是1-2mmol/L的药物溶液渗透到薄片中,表示这种薄片中每升含有1-2毫摩尔的该种药物。

4 回答431 围观

问蛋白组学的国内外研究进展

loveliufudan

蛋白组学的研究进展可概括如下:1. 蛋白质组分离技术取得长足进展,如双向电泳、液相色谱、质谱技术等,可以进行高通量和高灵敏度的蛋白质分析。2. 蛋白质组数据库的建立,如Swiss-Prot数据库,收集了大量蛋白质序列和结构信息。3. 蛋白质组Modification的研究,揭示了翻译后修饰的重要性。4. 蛋白质相互作用研究取得进展,如酵母双杂交系统可以高通量检测蛋白间的结合。5. 蛋白质组学与基因

4 回答484 围观

问蛋白组学入门相关问题请教

loveliufudan

蛋白组学入门可以关注以下几方面:1. 了解蛋白组学的基本概念和研究内容首先需要理解什么是蛋白组学,它的研究内容包括蛋白质的表达、结构、功能、互作用网络等。2. 了解常用的蛋白质分离技术如双向电泳、高效液相色谱、质谱技术,这些都是分离和鉴定蛋白质的重要技术。3. 了解蛋白质组学数据库如Swiss-Prot、Trembl等数据库,这些数据库收集了大量已知蛋白质的序列和功能信息。4. 了解蛋白质组学研究

4 回答323 围观

问小鼠肺泡灌洗液瑞氏-吉姆萨染色

dxy_91wmds88

细胞膜有不规则刺突，考虑细胞涨破影响染色效果，导致最后核的形态不是很清晰

5 回答1548 围观

问蛋白组学数据，为什么一个样品的3个重复，对于某一个蛋白，2个重复值很高，另1个却为缺失

晓雨知春来

有可能是样本本身存在实际的生物学变异。不同细胞亚群中该蛋白表达水平真的存在差异。

3 回答531 围观

问请问% W/W的含义

dxy_mqg1dtg8

% W/W是指质量百分比，即溶液中溶质质量与溶液总质量的比值，一般用来表示固体溶解在液体中的浓度。若要将% W/W转换为mg/kg的给药剂量，需要知道以下信息：1. 溶质的摩尔质量（或分子量）2. 溶液的密度假设您要将含量为5% W/W的溶液转换成mg/kg的给药剂量，以下是具体步骤：1. 计算溶质的摩尔质量（Molecular Weight, MW），例如溶液中的溶质是A，它的MW为200g/m

4 回答6127 围观

问双酶切，5000marker，应该是2000bp的目的片段和2500bp的载体片段，这个图完全不知道怎么解释

晓雨知春来

可能是载体seqs存在变异，插入片段大小不准确。

3 回答971 围观

问重组腺病毒质粒，转化到重组酶缺失X10-GOLD感受态中，不长单菌落。为什么

晓雨知春来

有可能是未重组的质粒无法在感受态中复制.也就不会表达抗性标记基因。

3 回答397 围观

问Trizol法提取DNA，A260/280应该在哪个范围比较好？提取的浓度一般是多少

煮栗了

1.8和2.1之前其实都可以的

6 回答6222 围观

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