实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问石蜡包埋组织可以提取RNA吗？怎么提取呢？

dxywode

可以。1. 自行准备：无水乙醇、生理盐水、二甲苯及无RNA酶1.5mL离心管。2. 取出析出液和洗涤液，按以下操作：a) 析出液：4.5mL加入25.5mL无水乙醇，混匀；9mL加入51mL无水乙醇，混匀。b) 洗涤液：9mL加入21mL无水乙醇，混匀；18mL加入42mL无水乙醇，混匀。c) 配制好的析出液及洗涤液如出现沉淀，可在37℃溶解，摇匀后使用。作者：清风拂面vv链接：https://

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问如何提高转染成功率?

Guoood

首先跟细胞类型有关，挑选转染效率较高的细胞系。然后用转染试剂及载体用无血清培养基稀释，充分包裹30min，再加到低血清培养基培养的细胞。

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问有没有推荐的提取rna快捷高效率的试剂盒?

养点鱼吃火锅

提RNA很快，15分钟-半小时

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问多糖多酚植物RNA提取

goonQ2HM

天根的多糖多酚试剂盒挺好用的，就是有点贵

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问流式图如何射门，原理是什么

txs900416

一般采用级联门圈门策略，首先圈出目标细胞群体，然后圈出单细胞群体，再通过标记的阴性和阳性选择出目的细胞。例如血液中的T细胞，先圈出PBMC门，再圈出单细胞门，再通过cd45+和cd3+圈出t细胞即可

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问核酸检测的假阴性如何解决?

txs900416

具体因素包括：样本质量差，比如口咽等部位的呼吸道样本；样本收集的过早或过晚；没有正确保存、运输和处理样本；技术本身存在的原因，如病毒变异、PCR抑制等。只能多次采样进行检测，并更新技术手段才能避免

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问实验有时候会出现误差，应该怎么样避免啊

Lv花开花落

1.多次测量取平均值2.使用精度高的仪器3改善测量方法

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问wb实验中如何跑出水平的条带？蛋白拖尾现象怎么避免？

dxy_gwrp7ndq

避免拖尾：可以根据情况调整蛋白量，同时降低一抗的浓度，缩短一抗的时间。

4 回答1619 围观

问污染的细胞怎么处理？可以挽救吗？

Guoood

细胞污染后一般很难救回来，加双抗救回来也很难保证细胞处理的效果，建议每次处理细胞都保证无菌操作，怕污染的话可以在细胞出现污染前加双抗预防。

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问细胞培养时能不能更换培养基的种类？

RC0628

每一细胞株均有其特定使用且已适应的细胞培养基，若骤然使用和原先提供的培养条件不同的培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。

4 回答2585 围观

问蛋白质实验相互作用的优势

dxy_gwrp7ndq

蛋白质与蛋白质之间相互作用构成了细胞生化反应网络的一个主要组成部分，蛋白-蛋白互作网络与转录调控网络对调控细胞及其信号有重要意义。

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问Transzol提取RNA

xiaojie17

我也遇到过，老师说是杂质没去干净，或者rna太多了。最后测纯度确实是杂质没去干净。

3 回答267 围观

问小鼠最大采血量是多少

小布丁瑶瑶

看情况以25g的成年小鼠为例，它的循环血量大约为1.8ml。以250g的成年大鼠为例，它的循环血量大约为16ml。

3 回答3986 围观

问为什么PCR测出来某基因表达高，但western测出来低表达

dxy_gwrp7ndq

1.所要检测的目的基因存在选择性剪切体，可以产生成熟的mRNA，但是不一定能翻译成蛋白质。2.做定量PCR的内参基因，最好与做western的内参基因保持一致. 3.注意转膜过程中蛋白质是否转移完全。

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问RNA浓度低/质量差的原因及解决办法有哪些？

dxy_gwrp7ndq

得率过低：提取样本过低总量不足或者提取样本过多裂解不彻底；解决方法：可以使用适当质量的组织或细胞进行提取，样本前处理一定要做好，裂解应充分。

1 回答1923 围观

问CsCl法从培养细胞中提取RNA时，RNA 的产量低的原因？

Amor良

1 ) 组织或细胞中 RNA 含量偏低：不同细胞或者组织中RNA的丰度不一样，RNA提取量也不一致。2 ) 样品起始量太少或者太多：样品起始量太少，则细胞组织中RNA含量较低，样品过多则超过裂解液的裂解能力，使得裂解不完全，从而RNA得率低。

2 回答498 围观

问每次做的MTT结果都有点不太一样，但趋势是一样的，除了考虑铺细胞的问题，还可以是什么呢？

三昧骨科

铺细胞前的计数要准确。同时不知道你用的什么细胞，如果是细胞株的话和代就没有关系了。然后你每次用同样试剂的话，加试剂的枪是否准确啊，再就是和个人手法有关系。建议把数据拿给老师看一下，一般都需要重复多做几次的，排除一些不好的实验结果。如果趋势一样，但是最后值差的很多，建议同样条件下重复多做几次，毕竟实验就是需要反复重复的

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问RNA提取时，OD260/OD280比值偏低

仗剑走江湖

比值偏低，说明有蛋白污染；补救办法trizol法上清吸取少点300ul即可；异丙醇吸干净；酒精挥发干

4 回答5208 围观

问单细胞测序如何学习分析

彭彭彭文

分亚群，第二步，寻找疾病mαrKer标志物，第三步，功能研究

3 回答659 围观

问如何提高实验数据准确性？

小兮的十八天

实验设计无误，保证实验操作步骤标准无遗漏，至少设置三次重复实验。

4 回答1718 围观

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