western blot 实验步骤的细节问题

电转印是蛋白免疫印迹中最常见的转印方法，即使用电场力驱动蛋白从凝胶中洗脱转移到膜上。此过程中，膜和凝胶放置在一起，并在两个电极之间放置滤纸。在电极之间施加电压，蛋白在电场力的作用下迁移到膜上。

电极之间产生的电场强度（以V / cm为单位测量）是实现转印的驱动力。电压及电极间距都会影响蛋白从凝胶中洗脱的速率。针对不同分子量的蛋白需要进行转印条件优化，以防止转印不足（蛋白不完全从凝胶中转移到膜上），或转印过度（蛋白穿透印迹膜造成损失）。

转膜流程：

1选择转印的方法及设备：可选择传统湿转、半干转或最新的快速半干转 方法。

2准备转印缓冲液及试剂：准备足够的转印缓冲液，用于转印槽以及凝胶、膜的预平衡。

3预平衡凝胶和膜：如有必要，用 转印缓冲液预先平衡凝胶和印迹膜。

4组装凝胶和膜的“三明治”：将凝胶和膜放置在被缓冲液浸湿的滤纸之间，做成转印“三明治”。

5转印过程：将“三明治”放入转印槽，并加入转印缓冲液，选择合适的转印条件，开始转印过程。

转印设备和过程主要有三种：

湿转系统，半干转系统和快速转印系统。

湿转系统

湿转系统适用于大多数各种分子量的常规蛋白转印。转印过程中凝胶和膜被浸入充满转印缓冲液的槽中。

半干转系统

凝胶和膜被夹在预先润湿缓冲液的滤纸之间，滤纸与平板电极直接接触。半干转系统的安装使用比湿转简单。

快速转印系统

快速转印系统是最近发展出来的技术，使用专用设备、专用滤纸及专用缓冲液来快速有效地转印蛋白。通常滤纸和湿润的膜预先放在一次性包装中，简化了转印“三明治”的组装。