实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问为什么冰冻切片不可以用甲醛固定

dxy_gwrp7ndq

如果用多聚甲醛或者是甲醛进行固定的话，组织速冻的过程中会产生冰晶，不利于组织的切片，并且影响片子的质量

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问shRNA和siRNA区别？

dxy_gwrp7ndq

相比化学合成的siRNA，shRNA具有更多优点：稳定性高、脱靶率低、作用时间长和易导入困难细胞等shRNA和siRNA的区别：

3 回答14106 围观

问单细胞rna-seq测序的数据分析流程和bulk的rna-seq一样么。

dxy_gwrp7ndq

bulk的表达矩阵是reads比对到基因的数目；单细胞的表达矩阵是reads比对到某个细胞的某个基因的数目(barcode用来区分细胞；UMI用来区分转录本/基因)

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问SDS-PAGE电泳实验相关问题？

府宅

1.缓冲溶液、SDS都要新鲜配制。2.避免加样过多，提高分辨率。小体积样品可给出窄带，加样体积根据样品浓度和凝胶厚度灵活掌握。一般上样体积为10-15uL（即2-10ug蛋白质）。3.加热变性后的蛋白质样品要放置到室温即电泳，不要久放，因为蛋白质的二硫键在高温下可能是会断开，但是暴露于空气中温度降低会重新形成二硫键，而且可能在过久放置过程中蛋白质可能会再折叠，更不要扔到冰箱里保存。

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问如何才能提高上机细胞的活率

府宅

磁珠分选效率会低一点，但细胞活性高。FACS分选的话要加双抗，注意无菌，分选的液体里面可以加血清湿润管子。

3 回答398 围观

问RNA干扰技术温度如何控制？

Kimser

在PCR仪上进行两步扩增反应：94℃和72℃。 PCR产物的纯化是4℃。

2 回答472 围观

问纯化好的蛋白怎么才能保持时间久一点？

府宅

短期保存（1周内）：对于短期保存，大多数蛋白可以保存在4 摄氏度下。4摄氏度下保存面临最大的问题是微生物的污染。因此，如果保存时间超过24小时，建议利用0.22 um的滤膜过滤样品，除菌后保存在无菌的管子中。值得注意的是，并不是所有的蛋白质都适合保存在4度下。长期保存：对于长期保存，冷冻是必须的。蛋白质溶液在速冻后可以在-20度或-80度中进行，-80度下的蛋白可以保存更长久。长期保存蛋白质的另一

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问ELISA实验如何尽量避免假阴性和假阳性？

dxy_gwrp7ndq

引起 ELISA 测定错误结果的原因主要有：①标本因素（类风湿因子、补体、嗜异性抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠 Ig (s) 抗体、交叉反应物质和其它物质等干扰）②试剂因素（标本管中添加物质的影响）③操作因素（标本溶血、标本受细菌污染、标本凝集不全、标本保存不当）

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问抗原修复如果使用EDTA修复法，用多少浓度的EDTA呢？

菲菲飞呀飞

EDTA的最佳浓度为1.5mg/ml血液，如果血少，中性粒细胞会肿胀分叶消失，血小板会肿胀、崩解，产生正常血小板的碎片，使分析结果产生错误。

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问抗原修复如果用高压热修复，具体要求和步骤是怎么样的？

菲菲飞呀飞

玻片要置于金属架上1)材料及试剂。家用不锈钢高压锅。加热板”玻片架放置容器(容量大约400 500ml)’抗原修复缓冲液(TivEDTA pH9.0,构橼酸钠pH 6.0)2)方法1.将合适的抗原修复缓冲液加入高压锅内，然后将锅置于加热板并开至最大功率，此时不要把盖子盖紧。在等待煮沸过程中，进行脱蜡至水。2.煮沸后，将玻片从自来水中取出放入高压锅内。小心热溶液-使用镊子。依照说明书加上加压阀。3.

3 回答1685 围观

问免疫科研入门者怎么才能设计好完整的实验？

菲菲飞呀飞

1、明确探究目的和已有条件，制定计划与设计实验的过程。2、尝试选择科学探究的方法及所需要的器材。3、尝试考虑影响问题的主要因素，有控制变量的初步意识。4、认识制定计划与设计实验在科学探究中的作用。注意：1、要明确实验目的，设计的方案要与猜想紧密相连，并且能够验证猜想是否正确。2、要选择合适的研究方法。一般常用的方法有控制变量法、转换法、现象或数据归纳法等。3、要根据需要列出实验器材设计实验步骤和记

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问蛋白质定量实验的注意事项有哪些？

Kimser

说一个才被老师说的事情，因为封闭时有点事情导致封闭时间过久，结果我的蛋白没有显色，，，本来以为问题不大，结果也不说啥都没有，但基本算是白做了。此外，一抗或者二抗的时间也需要安排好，最好是弄个定时器放旁边

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问淋巴细胞培养管的选择 24 48孔

菲菲飞呀飞

淋巴细胞培养既可选择培养板(24、48、96孔、培养瓶，也可选择三角烧瓶、试管等器■进行培养有研究表明提取的淋巴细胞用1. 5ml离心管培养72小时细胞生长状况良好细胞数与培养前比较,差异无统计学意义(P 20 05) .用青霉素小瓶进行培养淋巴细胞生长也非常好。可以认为,对散在的细胞培养来说用小器皿具有以下优点: (1)便于操作1.5ml离心管为次性使用，青称崇小瓶可反复刷洗，而培养板、培养瓶价

3 回答657 围观

问ACTIN为啥有两个条带？

DXY泡沫呀

有实验技术的原因，曝光的时候会有底片轻微移动的现象,出现很接近的两条

3 回答543 围观

问为什么WB显影后，有些位置没有条带，但内参上样量一致，重新转染后仍是没有，请问这是为什么，有什么解决办法吗？

小郭医生go

我的跑了都是质粒空载转染的没有出现目的条带，可能本身表达量就很低，或者你加大上样量试试看

3 回答511 围观

问WB总是做不出理想的条带肿么破？

飞天幻雪

做不出理想的条带是什么意思呀？内参不齐？没有目的条带？杂带太多？还是做出的趋势和实验预期不符合？？

3 回答603 围观

问做WB有什么要注意的吗

66QB1H

1.选择合适的分离胶浓度2.选择合适的电压、电流3.选择合适的一抗和二抗，并注意一抗二抗浓度和孵育条件（时间、温度等）3.洗脱时注意时间，太长太短都有影响4.配胶和转膜过程都要防止气泡

4 回答450 围观

问用dsRNA干扰后，应该根据什么选择检测干扰效果的实验呢？

小小袋袋

pcr测一测目标rna的表达情况，wb检测目标蛋白的表达情况，有改变后还可以考虑流式

3 回答637 围观

问为什么遗传物质就是核酸？

今天摆烂了咩

RNA是单链的，结构不稳定，一旦变异就没有对应的修复机制，而DNA的双螺旋结构可以很稳定的存在，复制。

4 回答630 围观

问在跑wb时同一个蛋白在不同组织或细胞中显示出不同的条带，有的一条有的两条，出现这种情况的原因是什么？

whilt-shirt

有可能是抗体对不同组织的特异性导致的

3 回答787 围观

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