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问
跑磷酸化蛋白是不是不能用奶粉封闭啊?什么替代最好?
YLO6WJ
可以用脱脂奶粉封闭,5%BSA也可以
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问
RNA提取OD多少合适做逆转录?
whilt-shirt
一般选择在1.6-2.0之间,越接近2.0越好,浓度在500ng/ul左右
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问
实验设备仪器,及其起步
迟C迟
提前准备细胞样品试剂:多聚甲醛 70%甲醇 丙酮 PBS Triton BSA DAPI染液 DABCO Tris 甘油仪器耗材:离心机 细胞培养箱 培养板 最重要的荧光显微镜另外给你实验步骤:细胞爬片免疫荧光实验步骤第一天:1. 在培养板中将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次,每次3min;2. 用4%的多聚甲醛固定爬片15min, PBS浸洗玻片3次,每次3min;3. 0.5%Triton
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问
为什么HEK293T细胞在玻片上状态很差?
whilt-shirt
293细胞的贴壁性比较差,有可能是细胞老化,也有可能是培养基原因
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问
双光素酶报告实验 验证靶基因
迟C迟
双荧光素酶报告实验检测灵敏度很跳,酶标仪检测出来的数值就算是重复孔之间差异有时候都是数量级的差别。建议用不一样的实验系统再次验证实验结果。
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问
怎样计算药剂对细菌的抑制效果?
迟C迟
首先需要做你目标细菌在不添加药剂情况下的生长曲线。其次设置药剂不同浓度添加到培养基中,再做这些情况下目标细菌的生长曲线,计算药剂是否有抑制作用。
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问
培养已经有耐药性的金黄色葡萄球菌时,有必要添加抗生素来保持其耐药性吗?添加抗生素的时间、添加在哪里在什么时候比较合适呢?
彭彭彭文
当然必须使用,在培养时,加入实验中培养基
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问
蛋白质纯度分析的方法有哪些?
毛桃子啊
蛋白质纯度鉴定的方法包括有电泳法、基于层析技术的方法、免疫化学法、蛋白质化学结构分析法和超速离心法等。其中最常用的是电泳法和高效液相层析(即高效液相色谱,HPLC)。质谱法可以与上述方法相结合,实现目的蛋白质和其他蛋白质的精确鉴定。
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问
mRNA药物在早期研发时,做动物/人体实验之前,需要做细胞水平的检测吗?
迟C迟
需要,看下CNS上相关的研究文章你就知道了。
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问
耐药细菌如耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌在培养过程中,是在那一步加入抗生素来保证细菌的耐药性的呢?是在保存液中加入还是液体培养基中?
迟C迟
细胞培养时就要在培养基中加入抗生素了。保存的时候可以直接吸取含抗生素的培养液加甘油保存。
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问
qPCR半定量不稳定?
迟C迟
首先检查自己实验过程、试剂是否正确。其次换个实验系统再次验证自己的想法。如果不一样的实验系统验证出来的结果都是跟你的想法相反,可能要考虑自己的预期结果是否正确了。
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问
RNA干扰提取RNA注意事项?
迟C迟
① 使用无 RNase 的塑料制品和枪头,玻璃器皿要消毒,避免交叉污染;使用性能较好的移液器,如 Eppendorf、Thermo 等;② DEPC 有剧毒,小心配制;配制溶液应使用无 RNase 的水;③ 操作人员应戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套;④ 样品应避免反复冻融,否则影响提取 RNA 提取得率和质量;⑤ 若下游实验对 DNA 非常敏感,可用不含 RNase 的 DNase I
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问
如何对蛋白质组(定性定量检测)庞大数据进行处理?
whilt-shirt
蛋白质组中标准化的工具较少,一般是自己编写代码。一般用apply结合sweep函数来实现。
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问
请问单细胞测序技术,用流式细胞术挑选完免疫细胞后,为什么再进行聚类,有的免疫细胞又被划分成其他种类的免疫细胞了。
whilt-shirt
在进行流式细胞术的数据分析时,圈门的方式和逻辑体现了我们对数据把控的准确性,以及对客观数据的理解性。所以建议在数据分析前一定要自己去搞清楚指标和指标的关系,再来按照一定的逻辑进行圈门才会获得比较客观严谨的结果。首先我们要知道,通常展示的结果大部分的时候都只是流式结果的一小部分,比如我们对一个细胞进行双染,流式的结果信息就有4个,即这群细胞双染的双阳群1个,双阴群1个,单阳群2个;那3染呢?即三阳1
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问
蛋白质定量测定,误差在什么范围内可以忽略不计?
丁香粉猪猪
蛋白含量测定,有好几种方法,你说的是什么方法不同的方法使用的仪器,要求条件,等等不一样,你让我怎么回答?比如:吸光光度法:UV280nm 测蛋白质溶液的吸收值,与标准蛋白对照,得出浓度。BCA法:Cu2+与蛋白质形成络合物,普通光线读取溶液表面“灰度”,得出浓度。
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问
哺乳细胞过表达质粒后收细胞时间对抽提全RNA的质量有明显影响吗?
王葱catherine
过表达质粒上面有抗性基因,细胞系构建成功后需要表达稳定,再抽取RNA
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问
胰岛素制备实验中,有什么方法可以有效地去除胰脏周围的脂肪?
迟C迟
首先取材的时候要尽量去除脂肪组织。胰岛素制备过程中,首先准备粗制品:将新鲜或冰冻猪胰(牛胰更好)除去结缔组织等杂质,绞碎成冰胰浆。称重量置提取罐中,加入1.5—2.0倍量的酸性酒精溶液,使PH为2.5—3.0,醇含量为70%左右,在温度为13—150度搅拌提取3h,压滤,使浸液尽量滤出。残渣再用上法提取一次。
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问
对于中药活性成分治疗急性溃疡性结肠炎,FHC细胞模型可以从哪几个方面来做机制呢?
丁香粉猪猪
1,自由基损伤,2,抗炎与免疫,3血液流变学
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问
原核表达蛋白纯化问题
丁香粉猪猪
一些蛋白质或 DNA 与带有标签的目的蛋白发生了非特异性相互作用, 可以用低浓度的去污剂 (2%的 TritonX-100 或浓度不大于 0.5%SDS)洗涤样品 (上样洗脱时) 或增加洗脱液的盐浓度 (氯化钠溶液低于 2mol/L) 。柱子没平衡好,平衡缓冲液没加咪唑,平衡液 PH 不适合,缓冲液 pH 要与蛋白质 pI +/-1-2
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问
为什么我的pcr产物和载体连不上?
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