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        原核表达蛋白纯化问题

        相关实验:免疫球蛋白纯化技术

        user-title

        goonQ2HM

        原核表达出的蛋白纯化条带不单一应该怎么办呢?是需要优化诱导表达条件吗,比如改变IPTG的浓度,或者诱导温度,诱导时间?哪个条件比较关键呢

        wx-share
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        3 个回答

        user-title

        丁香粉猪猪

        有帮助

        一些蛋白质或 DNA 与带有标签的目的蛋白发生了非特异性相互作用, 可以用低浓度的去污剂 (2%的 TritonX-100 或浓度不大于 0.5%SDS)洗涤样品 (上样洗脱时) 或增加洗脱液的盐浓度 (氯化钠溶液低于 2mol/L) 。柱子没平衡好,平衡缓冲液没加咪唑,平衡液 PH 不适合,缓冲液 pH 要与蛋白质 pI +/-1-2

        user-title

        dxy_gwrp7ndq

        有帮助

        1. 可以采用疏水层析纯化

        2.可以换一种缓冲液超声和纯化

        3.可以纯化后用离子交换、凝胶过滤。

        user-title

        府宅

        有帮助

        如果有抗体,做个western blot判断下,是杂带还是降解片段;

        如果是杂带,优先考虑优化你使用的纯化方案,如Ni柱,考虑延长washing buffer的时间和提高咪唑浓度,使用分辨率更好的填料;

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