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问
为什么预选实验跟实际有差距
迟C迟
这个同学,你首先得了解预实验,预实验不等于正式实验,一切结果以正式实验为准。如果实验不可重复,除了考虑操作原因,可能也得考虑课题设计初衷。
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问
请问为沉默效果较好,si-RNA应在细胞汇合度多少时添加为宜?
迟C迟
提前一天将细胞种植在24孔板中,以转染时细胞汇合度(Confluence)在30%左右为宜。
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问
RNA的提取原理是什么?
小布丁瑶瑶
RnA提取原理:Trizol是一种总RNA抽提试剂,内含异硫氰酸胍等物质,能迅速裂解细胞,抑制细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。
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问
如何提高RNA得率?
府宅
1.避免RNA酶污染:微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在,如皮肤,头发,所有徒手接触过的物品或暴露在空气中的物品等,此保证实验每个步骤不受RNA酶污染非常重要。2.健康的细胞转染效率较高。此外,较低的传代数能确保每次实验所用细胞的稳定性。为了优化实验,推荐用50代以下的转染细胞,否则细胞转染效率会随时间明显下降。3.针对RNA制备方法以及靶细胞类型的不同,选择好的转
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问
所用缓冲液的体积由哪些方面而定?
丁香粉猪猪
只要知道缓冲对的PH值,和要配制的缓冲液的pH值(及要求的缓冲液总浓度),就能按公式计算盐和酸的量。总结出pH值与缓冲液对离子用量的关系并列出了表格。只要知道要配制的缓冲液的pH,经查表便可计算出所用缓冲剂的比例和用量
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问
细胞培养需要注意什么?
迟C迟
首先注意观察细胞培养液的颜色。 现在的细胞培养液通常都放有酸碱指示剂(绝大部分是酚红)。 细胞在培养生长过程中,不断在培养液上清中累积酸性物质,时间长了,培养液变为黄色(同时培养液中营养物质耗尽)。 其次镜下观察细胞的生长状态是否良好,是否需要传代。 如果生长状态不好,需要对培养液进行调整(一般是加大 血清 浓度)。 过于密集出现大片融合或太密集而导致细胞脱落,则进行传代。 如果长势良好,且细胞培
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问
免疫荧光染色实验中染料的选择。
做药鹏
尽量选择光谱重叠比较少的荧光基团进行组合,进行两个不同蛋白的共染色。标记好荧光的细胞片应今早观察,或者用封片剂封片后在4℃或者-20℃避光保存,以免因标记蛋白解离或荧光减弱,还可以利用免疫荧光专用细胞处理试剂进行预处理减少自发荧光或荧光信号的淬灭。
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问
RNA干扰技术可以用在哪些领域?
小布丁瑶瑶
RNA干扰技术可以用于包括鉴定基因功能、疾病治疗、植物病毒抗性研究在内的多项研究领域。
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问
通过对引物进行预处理,但仍然存在异常(还是有杂质),应该怎么办?
迟C迟
首先搞清楚是什么杂质?如果是不溶的杂质,可以通过离心沉淀等方法,上清的引物还能用。如果是溶解性杂质,建议重新订引物吧。
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问
Wb实验中二抗的作用?
府宅
二抗用于检测细胞或组织样本中的蛋白表达。它与抗原特异性一抗结合,二抗可检测目标蛋白中的高度特异性氨基酸序列。二抗对一抗的指定区域或区域的特异性允许多个二抗与单一一抗结合,放大信号并增加检测敏感性。二抗保存的好可用2-3次。
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问
EDTA不小心弄到皮肤上,眼睛里,嘴里应该怎么办?
Kimser
EDTA用于福尔马林固定、石蜡包埋组织切片免疫组织化学染色前的抗原修复。虽然其ph是9,不过一般使用时都是稀释过的,所以危害不大,一旦进入眼睛或皮肤,先用大量流动自来水冲洗一段时间后再就医检查。注意防护,戴好手套和护目镜等,也可以换用柠檬酸缓冲液。
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问
用DEPC溶解的时候促溶温度在什么范围与样品类型有关吗?
dxy_gwrp7ndq
与样品类型无关,一般在室温下溶解就可以了
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问
超声粉碎细胞时需不需要冰上操作,怎么样才能不让温度升得太高?
whilt-shirt
正常来说是需要的,但是不太好操作,一般都是超声5-10s放冰上,然后再超声
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问
提出来的蛋白样品最多能保存多长时间呢?在什么条件下保存最好?
毛桃子啊
确定每个样品的浓度之后,可将其冻存于 -20 ℃ 或 -80 ℃(一年) 以备后续使用。建议分装保存,避免反复冻融。
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问
跑磷酸化蛋白有什么要特别注意的吗?出来的条带不明显,几乎看不到。
staywalking
1.收集细胞在冰上,加入磷酸酶抑制剂。足量裂解液。2.超声样本,促进蛋白溶解。3.增加上样量到40ug.4.根据推荐的方法稀释抗体。5.洗膜 TBST 5分钟三次。6.确定总蛋白是否有表达。然后排查该位点磷酸化是否被诱导,是否在合适的检测窗内(多设时间段)。用成熟的诱导Model制备阳性对照,可能你的模型或者样本里这个位点就是没有被磷酸化。
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问
RNA片断如何修复?
迟C迟
噬菌体的 RNA 修复系统是人们发现的第一个 RNA 修复系统,用来修复宿主细胞抗病毒反应等导致的 RNA 损伤,其修复途径由 T4 多核苷酸激酶磷酸酶(Pnkp)和 RNA 连接酶 1(Rnl1)共同催化。
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问
免疫组化标本保存用生理盐水还是甲醛?
迟C迟
甲醛和生理盐水都可以。如必须保存时,则应保持置4℃以下保存。 一般细菌涂片或器官组织切片经固定后可保存1个月以上。
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1534 围观
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问
对于靶基因的干扰实验,shRNA和siRNA该如何选择?
迟C迟
siRNA和shRNA之间进行选择时,要考虑的一个重要因素是实验时间的长短。 siRNA在细胞中瞬时表达的,通常在3-5天内进行检测,而shRNA可以通过病毒或质粒介导的转染保持稳定。
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问
大分子量蛋白(470kDa)如何快速转膜?
staywalking
Tris- Acetate gel电泳,低浓度甲醇冰水浴湿转。欲速则不达。
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问
使用Invitrogen iBlot2应该怎么快速转膜?具体步骤
丁香粉猪猪
参考 转膜:如何使用 Invitrogen iBlot 2转印系统7分钟快速干转】https://m.baidu.com/video/page?pd=video_page&nid=10074237698057605529&sign=6838240746659596356&word=%E4%BD%BF%E7%94%A8Invitrogen+iBlot2%E5%BA%94%E8
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