实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问实验设备仪器，及其起步

迟C迟

提前准备细胞样品试剂：多聚甲醛 70%甲醇丙酮 PBS Triton BSA DAPI染液 DABCO Tris 甘油仪器耗材：离心机细胞培养箱培养板最重要的荧光显微镜另外给你实验步骤：细胞爬片免疫荧光实验步骤第一天：1. 在培养板中将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次，每次3min；2. 用4%的多聚甲醛固定爬片15min， PBS浸洗玻片3次，每次3min；3. 0.5%Triton

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问为什么HEK293T细胞在玻片上状态很差？

whilt-shirt

293细胞的贴壁性比较差，有可能是细胞老化，也有可能是培养基原因

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问双光素酶报告实验验证靶基因

迟C迟

双荧光素酶报告实验检测灵敏度很跳，酶标仪检测出来的数值就算是重复孔之间差异有时候都是数量级的差别。建议用不一样的实验系统再次验证实验结果。

3 回答615 围观

问怎样计算药剂对细菌的抑制效果？

迟C迟

首先需要做你目标细菌在不添加药剂情况下的生长曲线。其次设置药剂不同浓度添加到培养基中，再做这些情况下目标细菌的生长曲线，计算药剂是否有抑制作用。

3 回答604 围观

问培养已经有耐药性的金黄色葡萄球菌时，有必要添加抗生素来保持其耐药性吗？添加抗生素的时间、添加在哪里在什么时候比较合适呢？

彭彭彭文

当然必须使用，在培养时，加入实验中培养基

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问mRNA药物在早期研发时，做动物/人体实验之前，需要做细胞水平的检测吗？

迟C迟

需要，看下CNS上相关的研究文章你就知道了。

2 回答400 围观

问耐药细菌如耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌在培养过程中，是在那一步加入抗生素来保证细菌的耐药性的呢？是在保存液中加入还是液体培养基中？

迟C迟

细胞培养时就要在培养基中加入抗生素了。保存的时候可以直接吸取含抗生素的培养液加甘油保存。

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问qPCR半定量不稳定？

迟C迟

首先检查自己实验过程、试剂是否正确。其次换个实验系统再次验证自己的想法。如果不一样的实验系统验证出来的结果都是跟你的想法相反，可能要考虑自己的预期结果是否正确了。

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问RNA干扰提取RNA注意事项？

迟C迟

① 使用无 RNase 的塑料制品和枪头，玻璃器皿要消毒，避免交叉污染；使用性能较好的移液器，如 Eppendorf、Thermo 等；② DEPC 有剧毒，小心配制；配制溶液应使用无 RNase 的水；③ 操作人员应戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套；④ 样品应避免反复冻融，否则影响提取 RNA 提取得率和质量；⑤ 若下游实验对 DNA 非常敏感，可用不含 RNase 的 DNase I

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问如何对蛋白质组（定性定量检测）庞大数据进行处理？

whilt-shirt

蛋白质组中标准化的工具较少，一般是自己编写代码。一般用apply结合sweep函数来实现。

2 回答533 围观

问预实验和正式实验结果差别很大

迟C迟

考虑两次实验有什么样品、操作、实验试剂差异。控制环境变量之后，建议提高样本量重新做，没办法，做实验就这样。

3 回答1185 围观

问请问单细胞测序技术，用流式细胞术挑选完免疫细胞后，为什么再进行聚类，有的免疫细胞又被划分成其他种类的免疫细胞了。

whilt-shirt

在进行流式细胞术的数据分析时，圈门的方式和逻辑体现了我们对数据把控的准确性，以及对客观数据的理解性。所以建议在数据分析前一定要自己去搞清楚指标和指标的关系，再来按照一定的逻辑进行圈门才会获得比较客观严谨的结果。首先我们要知道，通常展示的结果大部分的时候都只是流式结果的一小部分，比如我们对一个细胞进行双染，流式的结果信息就有4个，即这群细胞双染的双阳群1个，双阴群1个，单阳群2个；那3染呢？即三阳1

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问哺乳细胞过表达质粒后收细胞时间对抽提全RNA的质量有明显影响吗？

王葱catherine

过表达质粒上面有抗性基因，细胞系构建成功后需要表达稳定，再抽取RNA

2 回答572 围观

问胰岛素制备实验中，有什么方法可以有效地去除胰脏周围的脂肪?

迟C迟

首先取材的时候要尽量去除脂肪组织。胰岛素制备过程中，首先准备粗制品：将新鲜或冰冻猪胰（牛胰更好）除去结缔组织等杂质，绞碎成冰胰浆。称重量置提取罐中，加入1．5—2．0倍量的酸性酒精溶液，使PH为2．5—3．0，醇含量为70%左右，在温度为13—150度搅拌提取3h,压滤，使浸液尽量滤出。残渣再用上法提取一次。

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问对于中药活性成分治疗急性溃疡性结肠炎，FHC细胞模型可以从哪几个方面来做机制呢？

丁香粉猪猪

1，自由基损伤，2，抗炎与免疫，3血液流变学

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问原核表达蛋白纯化问题

丁香粉猪猪

一些蛋白质或 DNA 与带有标签的目的蛋白发生了非特异性相互作用，可以用低浓度的去污剂（2%的 TritonX-100 或浓度不大于 0.5%SDS)洗涤样品（上样洗脱时）或增加洗脱液的盐浓度（氯化钠溶液低于 2mol/L）。柱子没平衡好，平衡缓冲液没加咪唑，平衡液 PH 不适合，缓冲液 pH 要与蛋白质 pI +/-1-2

3 回答791 围观

问如何提高标记准确率？

迟C迟

请问是什么实验？在医学研究领域，生物标志物的研究思路，一般分为三个阶段：标志物的筛选（Discovery）,标志物的验证（Verification）和标志物的确认（Validation）。标志物的筛选通常需要借助高通量的组学手段，对大规模临床样本进行代谢组学或蛋白组学测定，筛选到具有统计学意义的差异代谢物或蛋白，经过一系列复杂的生物信息学分析，筛选出目标生物标志物。接下来的验证阶段，需要对更小范围

3 回答482 围观

问酶放大免疫实验技术中，请问放大指的是放大什么呢??? 是指显色，而使得实验结果便于观察吗？但是那荧光标记技术也可以叫做放大技术吗

迟C迟

在酶扩大免疫测定技术中，半抗原与酶结合成酶标半抗原，保留半抗原和酶的生物活性，当酶标半抗原与抗体结合后，半抗原分子上的酶蛋白与抗体密切接触，使酶的活性中心受到影响，酶的活性受到抑制。测定时标本中的半抗原、酶标半抗原与抗体竞争性结合，标本中的半抗原含量越高，加底物后其OD值越高。所以放大的是荧光信号。荧光标记技术并没有放大信号，所以不能叫放大技术。

3 回答632 围观

问亚硫酸盐修饰过得DNA，回收率总是很低，怎么优化呢？

迟C迟

如果你不想把时间花在摸索上面，用试剂盒转化纯化是个选择。一般用DNA重亚硫酸盐转化纯化试剂盒，可以搜一下，跟着Protocal做，DNA样品未甲基化胞嘧啶转化为尿嘧啶的转化率可高达99%。

3 回答761 围观

问孵一抗是4度过夜还是37度2小时的效果好？

迟C迟

这两种方法都可以，一般过夜4度是实验时间太长来不及做完，第二天继续，你来得及可以37度两小时。

5 回答6224 围观

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