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问
外泌体的生物记物是什么?
bamboopiggy
1.电镜检测:茶托型或一侧凹陷的半球形2.Western blot分子标志物检测:外泌体标志蛋白包括四跨膜蛋白家族,如CD9、CD63和CD81;细胞质蛋白,如肌动蛋白(Actin)和钙磷脂结合蛋白(Annexins);参与生物功能的分子,如凋亡转接基因2互作蛋白X(ALIX)、肿瘤易感基因101蛋白(TSG101)、热休克蛋白(HSP70、HSP90),以及细胞分泌的特异性蛋白
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问
免疫荧光细胞化学双重染鱼法中,两种一抗在混合稀释时怎么保证最终浓度?
dxywode
进行双重染色时,由于两种一抗种属来源不同,可把一抗混合使用。孵育结束后洗涤未结合的一抗,滴加二抗时,先加人生物素化―抗兔IgG(二抗)孵育,洗涤后,滴加SABC-Cy3复合物,经荧光显微镜下观察已出现特异性荧光,再进行FITC―抗小鼠IgG(二抗)的孵育,最后封片观察。其结果A抗原呈现绿色荧光,B抗原呈现红色荧光。此法应注意两种一抗在混合稀释时,抗体的终浓度应为每一种抗体的工作浓度。换言之,混合后
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问
DNA在什么条件下保存?
whilt-shirt
一般是-80℃保存,但是短期内用完的话可以放4℃
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问
DNA提取的要求是什么?总是实验失败,大家告诉一下
whilt-shirt
主要是无菌操作,尽量选用进口的试剂盒
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问
Western Blot实验,条带信号弱,难以分辨,怎么改进呢
whilt-shirt
加大上样量或增加上样浓度,更换新抗体或加大抗体浓度
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问
白色脂肪组织是由于那些因子而可以转化为棕色脂肪组织的呢
bamboopiggy
FGF21、PGC-1α、UCP1、PRDM16、ATGL、AMPK、PPARγ、脂连素等,都会促进白色脂肪棕色化。你可以直接找个综述来看看。
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问
Western Blot杂带太多的原因是
今天摆烂了咩
杂带多的原因——上样量过高,蛋白样本降解,蛋白本身有多个修饰位点,抗体未纯化,一抗浓度过高,洗涤不完全,封闭不好等都可能导致杂带产生。
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问
跑带,条带上有圆形的白孔?
岳努力岳幸运
感觉像是湿转的wb。最可能的原因是在转膜操作的时候,SDS-PAGE胶和pvdf或者nc膜中间有小气泡。在电转液中将夹板里的海绵和滤纸都充分浸湿,而且电转液的量应该足够淹没膜,把胶放在膜上的时候沿着一边放下去,可以轻轻刮排气泡。最后把滤纸海绵都盖好后,为了万无一失,最好用圆管在上面滚一滚充分排出小气泡!
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问
免疫荧光我想染3种蛋白,需要准备哪些?抗体和试验鼠。
whilt-shirt
需要对应的抗体,相关的试剂,除DAPI以外的三种波长的二抗
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问
如何更好的设计RNA引物?
bamboopiggy
1.根据文献,尤其是高分文献发表的引物。2.可以用公司网站提供的序列,尤其是thermo公司的。3.primerbank直接搜
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问
如何提高蛋白质提纯效率?
whilt-shirt
采用进口的专用试剂盒会提高提纯率
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问
死细胞对rna提取有影响吗
whilt-shirt
死细胞影响不大,在提RNA过程中主要还是看活细胞
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问
如何减少微生物实验操作的霉菌污染?
师医生说
有霉菌生长就会导致微生物生长的失败。首先保证实验室温,湿度。最好设置温控系统进行监控。同时高压灭菌后保持容器干燥。在生物安全柜内熟练进行操作。在操作前,要对生物安全柜进行至少40分钟的紫外线消毒和压力正常的条件下进行。
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问
qpcr实验每次平行的扩增曲线都相差很大,怎么解决?
bamboopiggy
1.保证样品融化完全,混匀,且用同一个白枪尖上样。2.保证qpcr mix和引物及水混匀良好。3.复孔之间上样后,高度一致,4.盖好膜,扩增完成后,复孔的高度还要一致,没有蒸发
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问
Fluo4 AM检测细胞质内钙离子浓度,钙离子探针荧光微弱?
dxywode
Fluo-4 AM(钙离子荧光探针) 是配制于无水DMSO (anhydrous DMSO)中的储存母液,浓度为2mM。用于细胞内钙离子检测时,Fluo-4 AM的常用浓度为0.5-5 μM。通常用含有0.5-5μM的Fluo-4 AM的适当溶液和细胞一起在20-37℃孵育10-60分钟进行荧光探针装载,随后适当洗涤,洗涤后可以考虑适当再孵育20-30分钟以确保Fluo-4 AM在细胞内充分转变成
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问
请问大家都是怎么做小分子抑制剂找通路或者靶点的?最佳使用浓度怎么确定?
bamboopiggy
现在可以通过买一些公司的药物库,直接高通量筛选,有用的小分子药物。一般是高通量10um的药物浓度,筛出有用的小分子化合物以后。再扩大浓度梯度,找到合适的浓度,至于小分子药对应的靶点,一般文献里,或公司给的说明书里会有,selleck应该就有这样的药物库
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1744 围观
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问
用的为特异性一抗,但是对照样品却跑出来相应位置的条带,是什么原因?
whilt-shirt
有可能是样本污染了,也有可能是抗体浓度过高
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371 围观
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问
如何保证GFP嵌合体监控蛋白质和蛋白质相互实验完整进行
dxywode
可以选用非变性聚丙稀醜胺凝胶试剂
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问
如何收集带flag标签的蛋白?
wuli猫宁
可以参考本链接,个人认为讲的很全面。【Flag 、HA、GFP标签蛋白纯化介绍】https://mr.baidu.com/r/CYK6W8o4ko?f=cp&u=6f9e5f2331512afd
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问
跑胶时候RNA的浓度多少比较好?
wuli猫宁
【跑胶_RN(浓度、纯度测定)】https://mr.baidu.com/r/CYMO5CUEIU?f=cp&u=1977c84f168fdd41此视频较详细,可以借鉴。
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