实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问玉米种子胚乳和果皮怎么样能更快速的分开，以降低RNA的降解？

迟C迟

是需要提取胚乳的RNA吗？我们一般取未成熟样品，在冰上用镊子挤出胚乳迅速放入液氮，提RNA问题不大。

2 回答581 围观

问小分子蛋白的WB要怎样跑？

天一湖医者

跑胶时注意观察溴芬兰前沿，小分子不要跑太久，前沿接近胶底部就可以了。另外跑完胶染一下胶，看看你marker的11kd那条带在什么位置

3 回答1566 围观

问请问是所有的DNA染料都需要避光4度保存吗？

迟C迟

尽量避光保存。现在商业化的DNA染料还是比较稳定的，不必过分担心。

3 回答632 围观

问跑通路蛋白总蛋白和磷酸化蛋白都升高可以说是激活了吗？跑的AKT和ERK两个位点都是

dxywode

western主要检测信号系统中的蛋白磷酸化水平，如果磷酸化水平升高则说明蛋白激活了。另外还有检测NF-kB和DNA的结合水平，主要采用EMSA，和报告基因的方法。检测TNF,IL,iNOS,COX-2的mRNA表达（RT-PCR）。检测IkB的磷酸化，泛素化和降解（IP,Western）。

4 回答4356 围观

问怎么让跑出的胶条带比较整齐，不歪歪扭扭？

天一湖医者

可以更换缓冲液！还有就是上样品时样品漂了。

5 回答1713 围观

问请问DNAmarker长时间放在室温下，会导致跑不出来条带或条带弥散不清晰吗

迟C迟

一般不会，我们实验室都是常温放置的。如果出现条带弥散的情况，可能考虑是不是电泳缓冲液需要重新配置了。

3 回答1850 围观

问为什么有的时候跑不出条带，然后背景还很糊？

迟C迟

背景模糊可能有以下几个原因：1. 没有封闭好，可能很大2. 一抗浓度太高，适当降低增加一抗稀释比例，你最好先做个titration，确定一个最佳的抗体稀释比例3. 二抗孵育时间太长，一般室温45min，二抗切不可孵育时间太长没有目的条带是主要问题，检查样品蛋白和抗体。

3 回答118 围观

问请教一下，准备做coIP，抗体选择原则是什么？

迟C迟

直接登陆Thermo Fisher Scientific 官网的抗体主页：www.thermofisher.com/antibodies ，选择具体的实验应用(Application)，例如WB/IF/IHC/ICC/ELISA/FACS等Tip：不同的实验对抗体的要求是不同的，一种抗体也有可能适用于多种用途。例如适用于Western Blot（WB）的抗体多数也适用于Dot blot、免疫组化（

3 回答2110 围观

问蛋白经凝胶过滤层析后，杂蛋白（与目的蛋白相差30kDa ）不能分离开，有改善办法吗？

天一湖医者

分不开一般可以选择其他的层析手段分离，比如离子交换或者疏水

3 回答225 围观

问目前国内蛋白质阵列技术有什么发展前景

迟C迟

蛋白质微阵列亦被称为蛋白质芯片，可以实现对生物蛋白分子准确、快速、大信息量的检测, 是一种高通量、微型化和自动化的蛋白质分析技术. 简单地说, 就是一次试验中同时检测几百甚至几千种目标蛋白/多肽的分析技术。

3 回答376 围观

问菌体破碎后用包涵体溶解液溶解后需要用0.45nm 的滤器过滤，但是总是堵住滤器，没有办法过滤，咋办呢？

迟C迟

可以用超声再次破碎一下菌体，裂解更充分。再者可以先离心裂解液，再用过滤器过滤。

3 回答423 围观

问在显色设备支持的情况下，荧光显色和化学发光显色，如何选择？

迟C迟

关注这么几点就好了，灵敏度要高，稳定性要好，背景要低，成本最好越低越好，几种方法各有优缺点。现在化学发光显色试剂盒ECL灵敏度最高的能够达到飞克级别了，不仅灵敏度要高，检测范围也要广，我们前段时间试了炎熙的极敏型试剂盒，灵敏度很高，也有其他灵敏度的可以选择，例如增强型，超敏型，稳定性都很好。

3 回答473 围观

问Co-IP下游还可以开展哪些分析实验？

迟C迟

根据你的实验目的来，多看看文献，看看相同领域的研究者是怎么做的。CO-IP一般是验证性的，下一步可以通过基因编辑在实验对象上验证蛋白功能。

3 回答339 围观

问影响盐析的因素具体有哪些？

迟C迟

影响盐析的因素很多，如蛋白质的浓度，盐的浓度，饱和度和pH，温度等都可影响盐析的结果，操作时要充分注意。盐析时，溶液中蛋白质的浓度对沉淀有双重影响，既可影响蛋白质沉淀极限，又可影响蛋白质的共沉作用。

3 回答4691 围观

问Rna提取提纯实验中，用来溶解RNA的DEPC水是否要经过高压处理

迟C迟

商业化的DEPC水不需要再处理。注意分装使用，以防污染。

3 回答482 围观

问蛋白质微阵列技术的影响因素有哪些？

迟C迟

蛋白质微阵列就是蛋白芯片技术，固定在芯片上的蛋白可以是：抗原、抗体、小肽、受体和配体、蛋白质-DNA和蛋白质-RNA复合物等。所以影响因素包括样品质量、检测技术和数据分析。

3 回答541 围观

问染色质为什么要片段化？片段化的长度为什么是200-1000？片段化过度或不足对实验会有什么影响？

bamboopiggy

你说的是做chip吧？chip是要把染色质打断,好让你的目的蛋白和dna更好的结合，太长了构象复杂，不利于蛋白质和dna的结合，一般打的片段，在200-1000bp之间，就可以。太小了，可能结合不好。

3 回答773 围观

问蛋白质提取纯化实验中，第一步在原材料中加缓冲盐溶液体积如何确定？提取环境温度设在多少合适？

万千490

稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常用的溶剂，通常用量是原材料体积的1-5倍，提取时需要均匀的搅拌，以利于蛋白质的溶解。提取的温度要视有效成份性质而定。一方面，多数蛋白质的溶解度随着温度的升高而增大，因此，温度高利于溶解，缩短提取时间。但另一方面，温度升高会使蛋白质变性失活，因此，基于这一点考虑提取蛋白质和酶时一般采用低温（5度以下）操作。为了避免蛋白质提取过程中的降

2 回答390 围观

问请问果汁有机酸含量测定这个实验怎么做？

迟C迟

请参考GB 5009.157-2016，食品中有机酸含量测定有详细步骤。

3 回答554 围观

问SSR分子标记如何定位基因

迟C迟

简单重复序(SSR)也称微卫星DNA，其串联重复的核心序列为1一6 bp，其中最常见是双核苷酸重复，即(CA) n和(TG) n。主要通过微卫星序列两端互补序列设计引物，通过PCR反应扩增微卫星片段，由于核心序列串联重复数目不同，因而能够用PCR的方法扩增出不同长度的PCR产物，将扩增产物进行凝胶电泳，根据分离片段的大小决定基因型并计算等位基因频率。在真核生物中，存在许多2-5bp简单重复序列，称

3 回答9946 围观

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