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问
植物蛋白质的提取方法及注意事项?
迟C迟
1、将组织称重,减去EP管重量,研磨一定要充分2、每100mg组织加入1mL(1mg ,10ul)试剂,冰上裂解半小时3、匀浆(注意低温操作),开20秒,关2秒,共打20次,每次用水冲洗,擦干,超声完后放冰上4、将匀浆液移至1.5mL预冷离心管5、离心,12000转,4℃,30分钟6、取上清至新的预冷的EP管7、BCA定量8、放入—80℃
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问
人多能干细胞培养基都需要什么成分
迟C迟
基础培养基为DMEM/F12培养基;添加剂包括碳酸氢钠400~600 μ g/ml、硒酸钠8~20ng/ml、重组人胰岛素生长因子10~30ng/ml、重组人碱性成纤维细胞生长因子80~120ng/ml、重组人乳铁蛋白7~13 μ g/ml、抗坏血酸50~70 μ g/ml以及重组人转化生长因子lng/ml~3ng/ml。
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问
怎样实现单细胞测序数据最大化
迟C迟
单细胞数据分析的第一步就是分亚群(当然前期肯定是需要先做数据预处理的),通过样本比较发现新的细胞亚群或比例差异显著的亚群。亚群分好之后最重要的一步(也是最难的一步)就是对亚群进行细胞类型注释了。我们会结合细胞类型marker基因、细胞类型注释软件和文献数据做比对的方法综合进行注释。第二步:寻找marker标志,根据自己实验数据的分类亚群,找每一个亚群特异表达的marker基因。如果某个亚群只在疾病
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问
大家有没有提过植物细胞外囊泡或者叫外泌体或外泌体样纳米颗粒
天一湖医者
步骤:(1)上清液分离:将细胞培养后的培养基,离心去除杂质,分离出培养上清液;(2)一次提取:将步骤(1)所述培养上清液与外泌体提取液混合后进行孵育,孵育后得第一孵化液,对第一孵化液进行离心浓缩,得到含外泌体的浓缩液;(3)二次提取:将步骤(2)所述含外泌体的浓缩液加入无菌pbs溶解后加入外泌体提取液进行孵育,孵育后得第二孵化液,将第二孵化液进行离心收集底部沉淀,得细胞外泌体。
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问
为什么电泳出来的marker一样,转膜后出来的膜条,一个marker清楚,一个marker变粗。
米米米小喵
建议电泳后胶进行考马斯亮蓝染色、转膜后的膜进行丽春红染色以进行逐步检验问题出在哪。
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问
咋写阿尔兹海默文献综述?
大草原的小灰驴
建议先完善一下查找文献的资料,有效提取其中的关键点,然后依据文献的标志物撰写相关的综述。
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问
想问一下,细菌DNA pcr跑胶之后 在正常的条带上方 都有一整行整齐的暗暗的条带(不是拖尾)应该考虑哪些可能造成这个结果的因素
迟C迟
如果每次都有,不管是否换了样品,可能是成像系统出现了故障。如果是远离点样空端出现暗条带,可能是引物二聚。
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问
透射电镜,请问各位大神,我做的颗粒物,它不溶,现在要收集细胞做电镜,可是那个颗粒物怎么把它过滤掉呀?
Topmicro
颗粒物直径多大?可以选择合适孔径的尼龙网过滤,比如70微米或者120微米。
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问
做WB,跑胶的时候,有黄色的拖尾,有一个孔甚至都直接变成黄色的了,想请教一下是胶的问题还是别的什么原因
cxsm
可能是loading buffer的PH吧
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问
做MTT实验时,铺板时间太长,会对细胞有影响吗?多久时间会对细胞有影响?
cxsm
这很难说,要尽量保证细胞的生长空间和营养物质的提供
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问
纸层析定性糖类物质,显色剂里的硝酸银的水丙酮饱和溶液,加多少硝酸银啊?配方:AgNO3的水丙酮饱和溶液,V水:V丙酮=1:200
天一湖医者
硝酸银O.1g溶于水lml,加2-苯氧基乙醇lOOml,用丙酮稀释至200ml,
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问
关于细胞凋亡的流式细胞术
天一湖医者
流式图有很多种,最常用的是流式直方图和流式散点图,还有流式等高线图。流式直方图只能显示一个通道的信息,流式散点图和流式等高线图可以同时显示2个通道的信息。 流式通道 散射光通道 散射光通道有两个,包括FSC通道和SSC通道,一般所有的流式细胞仪均有这2个散射光通道; FSC,即前向角散射,它的值代表细胞的大小。细胞体积越大,其FSC值就越大。所以可以利用细胞的FSC值初步比较细胞的
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问
中和抗体实验中加病毒对照的时间及原因。
Topmicro
加病毒对照的时间根据细胞类型确定,一般用处于生长相刚达到完全融合的细胞进行病毒滴定。
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问
质谱中肽段匹配打分是怎么来的,代表什么
异乡人hyq
做PMF一般得分超过60分(P<0.05)就算成功鉴定,而串联质谱,得分超过60分或者虽然没有超过60分,但是有最少一条肽段的得分超过30分就算成功鉴定。
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问
质谱中的假阳性和假阴性什么意思
lzy必有我师
我们讲的假阳性通俗一点就是并不是真正的阳性,假阴性也就说明不一定就是阴性,而是阳性,但有可能因为某种特定的因素导致其结果是阴性的。
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问
蛋白质组学,网络药理学找差异蛋白?
米米米小喵
蛋白质组学和转录组学都是从基础研究水平上来缩小我们实验的范围,运气好,能够碰到一个单基因控制的,或者相互作用网络比较简单的蛋白,我们就能具体解决某一个问题,但大部分时候只能够给我们提出一个方向。
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问
rna和探针加热变性后,在冰中速冷多久合适
大草原的小灰驴
我们一般放置在冰盒中三分钟以上。时间太短作用会不充分,无法防止形成双链结构,时间太久会可能RNA不稳定容易降解掉。
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问
从左到右依次为input,IgG,IP。蛋白分子量是110kD,但是IP组的蛋白条带在100kD。请问这个结果能用吗?
dxy_9elsat18
可以用。IgG 家族有4类: IgG1,IgG2, IgG3, IgG4. IP 共沉淀其中一类,分子量在100 Kd 左右。
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问
刚染毒的细胞有必要做细胞恶性程度鉴定吗
dxy_u3sb70e2
可以鉴定 也可以每隔一段时间鉴定
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问
传代细胞培养胰酶时间问题?
Topmicro
胰酶消化时间得根据你的细胞特点来定,一般控制在1-3分钟左右,你可以每隔一分钟吹打试一下。
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