实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问疏水及方向层析和凝胶排阻层析提纯蛋白方法的各自适用于什么情形？

天一湖医者

巯水及方向层析：疏水层析也称疏水作用下层析(从分离纯化生命物质的机制来看，也属于吸附层析一类。疏水层析和反相层析分离生命物质的依据是一致的，利用固定相载体上偶联的疏水性配基与流动相中的一些疏水分子发生可逆性结合而进行分离。该方法基于的是蛋白质的疏水差异，在高盐溶液中，蛋白质会与疏水配基相结合，而其他的杂蛋白则没有此种性质，利用此种性质，可以将蛋白质初步的分离，用于盐析之后的蛋白质进一步提纯。凝胶排

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问脱脂奶粉中含生物素，如果实验中有涉及到“生物素”时需要注意什么？

bamboopiggy

脱脂奶粉中含有少量的生物素和碱性磷酸酶残留，在使用生物素-亲和素系统和碱性磷酸酶标记的二抗时，也会产生高背景或使得本底水平增高。

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问转膜液加甲醇的目的是什么？

bamboopiggy

甲醇加到转移缓冲液中主要有两种作用:1.稳定凝胶的大小,2.除去与蛋白质分子复合的SDS.

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问电泳时 Marker 总跑不全所有条带，即使用增大胶浓度仍不全？

bamboopiggy

一般用10-180kd的marker，在10%的胶上是可以跑全的，看你的实验目的，不行可以买预制胶，有梯度胶，显示所有的marker在10180之间。

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问如何提取细胞表面蛋白质呢？

bamboopiggy

去买一个试剂盒，可以直接提，可以去thermo的官网看看，好多可以用的试剂盒，便宜的碧云天有。

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问原代细胞过表达某基因能做稳转嘛

bamboopiggy

能活15代的话，做稳转没问题，稳转，一般筛2周差不多就筛出来了。

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问请教这个文献中唇颈环HE染色结果怎么看,是通过什么看出上皮组织组织损伤的呢？

bamboopiggy

因为好奇，我直接调出来原文看了一下： Black dashed lines with arrowheads outline the region of tissue damage in (P) and (Q) upon Srsf1 (P) and Srsf3 (Q) deletion, respectively. Dashed lines outline laCL---带箭头的黑色虚线分别勾勒出

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问核算斑点杂交，显色问题

天一湖医者

应少量屡次点样，防止样品外渗，不利于观察显色.将杂交膜封入杂交袋中，参加杂交液，应尽量除去气泡再封口.防止杂交不完全，显色不明显.

3 回答437 围观

问请问这种核苷酸同源性和氨基酸同源性分析的图，是用什么软件做出来的呢？

天一湖医者

有很多，比如下载一个DNAMAN就可以了！

5 回答1465 围观

问做WB时一抗洗完一定要马上敷二抗吗？

府宅

要立马敷二抗，如果不洗，一抗可以过夜，但洗完之后就要马上敷二抗，要不会影响结果

6 回答4362 围观

问各位大神，细胞因子检测的ELISpot实验数据如何处理呢？为什么我看其他实验室的小伙伴们都乘以1.25呢，这个系数是如何定的呢？

天一湖医者

ELISpot实验数据结果采取为斑点计数（可人工计数，也可用自动读板仪计数）

2 回答367 围观

问病毒感染滴度IFU检测时，在加甲醇固定过程中，有明显的白色细胞悬起来正常吗？

cxsm

正常情况下甲醇固定的时候，细胞会变白，死细胞在你去培养基的时候基本会带走，有可能是你加甲醇的时候把细胞冲起来了。

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问细胞增殖检测（MTT法）细胞数问题？

天一湖医者

移液时的误差，或者部分边缘蒸发。

3 回答633 围观

问细胞增殖检测细胞浓度问题？

天一湖医者

细胞的浓度并不需要那么精确,关键是接种于每孔的细胞数就大致处于同一水平。比如做MTT,起初用的细胞浓度为5000/ml,每孔100ul,培养3天观察,发现细胞数太少,各孔OD值反面难于比较。后来换用 10000/ml,结果就很好。当然细胞数也不能太多,这其实取决于你细胞的生长速度,生长快的细胞,可接种浓度低点。这主要是使细胞增殖率不致受处理因素之外的其他因素影响,比如接触抑制,营养竞争。总之,做

4 回答711 围观

问想请问检测细胞凋亡率除了流式还有什么方法吗？

bamboopiggy

检测凋亡的方法有好多，但是建议还是流式检测，因为最方便。其他的方法包括：Caspase-3活性检测Caspase（cysteinyl-aspartic acid proteases）蛋白家族的活化是细胞凋亡的特征，在介导细胞凋亡过程中具有重要的作用。其中Caspase-3作为关键的执行分子在细胞凋亡信号传导的许多途径中发挥功能。Caspase-3正常细胞中以酶原形式存在，在凋亡早期被的活化，但在凋

5 回答775 围观

问洗必泰栓剂中冰片与乙醇的作用是什么？

未来9

冰片，局部应用有止痛及温和的防腐作用，同时也具有抑菌抗炎作用；乙醇，应该是用来溶解或稀释主药然后与基质混合的溶剂

4 回答5666 围观

问引物设计及内参问题（救救）

cxsm

这个检测的是人的前列腺癌的基因变化，应该用人的。

3 回答581 围观

问跑蛋白的时候一定要复温吗

liuyuqiang886

不用，只要解冻后混匀即可。亲试做了好多年没有复温，结果很好！

5 回答326 围观

问实验室养的昆明雄鼠每次看都有死亡如何避免？

动物实验小白

我好像知道为啥了，应该是喂食量少

3 回答451 围观

问小鼠乳腺癌模型建立选用哪个细胞株比较好？

susul1982

若是Balb/c小鼠的话，用D2F2小鼠乳腺癌细胞

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