• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购

        植物蛋白质的提取方法及注意事项?

        相关实验:特殊蛋白质的分离纯化

        user-title

        dxy_li2d9i74

        wx-share
        分享

        3 个回答

        user-title

        迟C迟

        有帮助

        1、将组织称重,减去EP管重量,研磨一定要充分

        2、每100mg组织加入1mL(1mg ,10ul)试剂,冰上裂解半小时

        3、匀浆(注意低温操作),开20秒,关2秒,共打20次,每次用水冲洗,擦干,超声完后放冰上

        4、将匀浆液移至1.5mL预冷离心管

        5、离心,12000转,4℃,30分钟

        6、取上清至新的预冷的EP管

        7、BCA定量

        8、放入—80℃

        user-title

        Eason老歌迷

        有帮助

        最常见的方法有碱溶酸沉法、酶提取法、有机溶剂提取法、盐溶提取法、反胶束萃取法等。

        注意事项:1.尽可能提取完全或降低样本复杂度,只集中提取目的蛋白;

        2.保持蛋白处于溶解状态(通过裂解液的pH盐浓度,表面活性剂,还原剂等的选择);

        3.提取过程防止蛋白降解、聚集、沉淀、修饰等(低温操作,加入合适的蛋白酶和磷酸酶抑制剂);

        4.尽量除去核酸、多糖、脂类等干扰分子(通过加入核酸酶或采取不同提取策略);

        5.样品分装,长期于-80℃保存,避免反复冻融。

        user-title

        未来9

        有帮助
        • 植物蛋白质的提取方法基本上有这几种:盐析法、有机溶剂法和等电点法。
        • 注意事项
        • 1、操作尽可能置于冰上或者在冷库内进行。
          2、不要太稀,蛋白浓度维持在μg/mL~mg/mL。
          3、合适的pH,除非是进行聚焦层析,所使用的缓冲溶液pH避免与pI相同,防止蛋白质的沉淀。
          4、使用蛋白酶抑制剂,防止蛋白酶对目标蛋白的降解;在纯化细胞中的蛋白质时,加入DNA酶,降解DNA,防止DNA对蛋白的污染。
          5、避免样品反复冻融和剧烈搅动,以防蛋白质的变性。
          6、缓冲溶液成分尽量模拟细胞内环境。
          7、在缓冲溶液中加入0.1~1mmol/LDTT(二硫苏糖醇)(或β-巯基乙醇),防止蛋白质的氧化。
          8、加1~10mmol/LEDTA金属螯合剂,防止重金属对目标蛋白的破坏。
          9、使用灭菌溶液,防止微生物生长。
        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序