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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
免疫组化实验过程中,切片背景过深是怎么回事?
bamboopiggy
降低抗体浓度,主要是二抗的浓度,在二抗孵育显色过程中,时不时的拿到镜下看看,如果觉得可以了,就停止孵育
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问
一抗是兔来源的抗体,二抗可以用抗山羊的二抗来匹配吗?
Mani-F
不可以用抗山羊的二抗,二抗必须用抗兔的!
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问
免疫组化实验过程中,对照组无染色,怎么排查原因啊?
bamboopiggy
对照组找确定的阳参,如果阳参无染色,证明实验过程有问题,首先看抗体的种属是否合适,如果合适,再看试剂是否有问题。
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问
怎样增加蛋白样品的稳定性?
雨婷42B1
尽量减少保存蛋白的反复冻溶,可以将提取的蛋白少量分装于离心管,用时取出即可。
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问
若转膜不完全时,下一步该怎么办?
bamboopiggy
换转膜的三明治夹子,结果不可信,没有继续往下做的必要了,当然,看看抗体是不是能用,也是可以的。
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问
如果上样量超载了怎么办?
bamboopiggy
wb上样多了的话,尝试 用strip buffer洗洗,或者是降低一抗,二抗的浓度。
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问
蛋白变性后,如何可以提高保存时间?
书香雪峰
蛋白质可以保存在-20度或-80度中,避免反复冻融
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问
做 200kd 以上蛋白的 Western Blot 时注意事项?
bamboopiggy
用8%的胶,甚至可以用6%的胶,转膜时间要相对延长,买分子量差不多的marker,看转膜是否转过去了。
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问
蛋白的上样量要怎样根据实验的要求来确定?
bamboopiggy
一般你跑wb的话,40ug/ul就足够了,如果你要跑考染的,也可以用40ul的,但是银染,你只需要用1/6的量就可以了。
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问
一抗,二抗的比例是比较重要,怎样调整好一抗,二抗的比例?有没有经验分享一下,谢谢
bamboopiggy
一般,拿到一抗就先1:1000 试一下,如果浅就改1:500.如果深,就改1:2000,基本差不多,二抗,问卖给你的公司,他们一般有个参考值,有的1:4000,有的1:1-2万。
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问
抗体工作溶液可以储存反复使用吗?
bamboopiggy
看你用的频率,如果每天都用,至少可以反复用三次,如果不是每次都用,可能一周左右还是可以再用的。
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问
为什么浓缩胶和分离胶的电压不一致?同样的电压可以吗?
bamboopiggy
可以一样的电压,电压不一样,是想在浓缩胶中,将蛋白压成一条线,所以想让蛋白走的慢,在分离胶中,是为了把条带分开,这时候用低电压,其实也是可以的,就是时间太长。
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问
转膜时何为湿法,何为半干法?
bamboopiggy
湿转法就是转膜的时候,膜 胶等都是泡在转膜液中的,半干转,是做三明治夹心的时候,用转膜液赶走气泡等,然后直接加入电转仪,不用加电转液,两个方法都好用。
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问
Transwell实验上下层培养基为什么不会相互扩散?
bamboopiggy
上下层的培养基会扩散的,但是还是有血清的浓度梯度存在的,well内的细胞在无血清的培养基中,会向浓度高的有血清的培养基中爬,尤其是带ECM胶的。
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问
抽提的质粒DNA电泳时怎么出现基因组DNA的污染?
bamboopiggy
加buffer2 裂解大肠杆菌的时候,操作轻柔,一定按照kit的说明书给的时间,及时加入buffer3,终止裂解。否则就会出现genomic DNA的污染。
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1278 围观
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问
加样时DNA飘出加样孔外?
bamboopiggy
你将DNA和loading buffer混合以后再往胶孔里面加啊,注意loadingbuffer的浓度。
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问
B16细胞离心之后的细胞颜色
bamboopiggy
B16就是黑色素细胞瘤,在细胞多了以后,培养的上清都会变成黑色的,是细胞产生的黑色素增多所致,没问题。
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问
细菌的透射电镜染色该怎么做呢?
bamboopiggy
染色之前,当然要固定,最好这个你找专门做切片的技术员帮你弄。
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问
细菌的SERS成像怎么做呢?
bamboopiggy
用3-巯基苯硼酸预标记细菌细胞,使其与金纳米粒子络合。对表面增强拉曼光谱进行整体整理,以生成细菌种群的全景化学图像。该方法已成功地用于研究大量细菌种群在选定植物组织上和组织中的分布。这项研究表明,SERS成像在研究复杂基质中的细菌细胞方面具有巨大潜力,在某些方面优于电子显微镜和荧光显微镜。链接: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33592747
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问
为什么在FAM VIC ROX CY5四个通道下,在做试剂加速的时候,FAM通道总是扩增变差?
n0y0j7
四个通道波长不一样,还是fam用的多,性能变差
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