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实验问答

23,953,415 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问H1975和H358细胞一般消化时间是多少。

huarenqiang5

H1975细胞置于37℃培养箱中消化1-2分钟。H358细胞一般消化3－5分钟。

4 回答381 围观

问正常培养的细胞，没做任何处理，会有死亡的细胞，每天都有，培养基ph也测过7.3，还会有哪些原因呢

huarenqiang5

可能的原因有培养箱内无CO2；培养箱内温度波动太大；细胞冻存或复苏过程中损伤；培养液渗透压不正确；培养液种有毒代谢产物堆积等。

5 回答311 围观

问为什么我跑的凝胶，银染后会有一条连着的条带，没加样的泳道也有

此用户已注销

质量问题：试剂的质量问题同样会影响实验效果。如果使用的试剂质量不佳，银染条带就可能出现不均匀或出现明暗不一、模糊或假阳性的情况。

3 回答678 围观

问蛋白提取时样品中蛋白的均一性不好怎么办

dxy_mqg1dtg8

可以尝试以下几种方法：1.细胞破碎条件的优化：细胞破碎是蛋白提取的关键步骤，可以选择适当的细胞破碎方法和条件。常见的方法包括超声波破碎、冻融破碎、高压破碎等。不同的样品可能需要不同的破碎方法和条件，因此可以尝试优化细胞破碎条件，如破碎时间、温度、破碎缓冲液的配比等，以提高蛋白的均一性。2.添加蛋白质稳定剂：蛋白质稳定剂可以帮助维持蛋白的稳定性和均一性。常用的蛋白质稳定剂包括蛋白酶抑制剂、还原剂和胺

4 回答909 围观

问如何提高bca测蛋白浓度的标准曲线的R值

dxy_mqg1dtg8

以下是一些提高BCA测蛋白浓度标准曲线R值的方法：1. 充分混合工作试剂：在进行BCA测定时，工作试剂的各个成分需要充分混合均匀，否则可能会影响测定结果的准确性和可重复性。因此，在使用BCA试剂盒时，需要充分摇匀工作试剂，确保各个成分均匀混合。2. 优化标准曲线的制备：标准曲线的制备对于BCA测定结果的准确性和可重复性至关重要。为了提高标准曲线的R值，可以优化标准品的浓度和数量，以及标准曲线的拟合

3 回答2068 围观

问使用AdEasy构建腺病毒载体质粒，X10-gold扩增后，挑单克隆提质粒，PacI酶切线性化，并未出现两条条带！

dxy_mqg1dtg8

通常情况下，提质粒和酶切是验证腺病毒载体质粒的常用方法，但是如果您希望避免浪费酶，也可以尝试使用PCR进行验证。以下是一些可能的方法：1. 用限制性内切酶验证：您可以设计一对引物，将其扩增出期望的片段，然后使用限制性内切酶对扩增产物进行切割，以验证是否得到了正确的片段。2. 用测序验证：您可以通过将扩增产物进行测序来验证是否得到了正确的片段。

3 回答439 围观

问SEC凝胶色谱柱被蛋白污染进空白有峰如何冲洗

土井挞克树

用流动的蒸馏水进行冲洗，冲洗3-5次

3 回答594 围观

问做蛋白组学，组织可以放负80度多久？

huarenqiang5

在-80°可以放半年左右没问题，如果时间久了会对样品的稳定性有一定的影响。

3 回答419 围观

问目前单细胞的蛋白质组学测序分析有哪些常用的方法？

dxy_mqg1dtg8

1. 质谱技术：质谱技术是目前最为常用的单细胞蛋白质组学技术之一。最近，研究人员开发了一种称为SLIM（single-cell proteomics by mass spectrometry）的技术，可以在单个细胞中检测到超过500个蛋白质。此外，研究人员还利用微流控技术和质谱技术，开发出了一种名为SCoPE-MS（single-cell proteomics by multiplexed seq

4 回答627 围观

问两个不同种属来源的单克隆一抗指标，能否在一张膜上同时孵育？

huarenqiang5

两个不同种属来源的单克隆一抗指标不能在一张膜上同时进行孵育。

3 回答1409 围观

问关于单细胞测序

dxy_mqg1dtg8

单细胞测序在血液病领域具有广泛的应用价值。以下是一些可能的方向：1. 了解血液病的病理机制：单细胞测序可以帮助研究人员探究血液病的病理机制。例如，单细胞测序可以帮助鉴定癌细胞和正常细胞之间的转录差异，以及基因表达水平和细胞类型之间的关系。2. 识别血液病的亚型和分子标记：单细胞测序可以帮助鉴定血液病的亚型和分子标记。例如，单细胞测序可以帮助研究人员识别癌细胞的特异性表达基因，从而为临床治疗提供更精

4 回答604 围观

问多聚赖氨酸铺板

huarenqiang5

培养瓶没有晾干可能会导致细胞不贴壁。

3 回答626 围观

问限制性内切酶的奇怪问题

dxy_mqg1dtg8

这种情况可能是由于GGATCC的酶切位点与GGTACC的酶切位点具有相似度，导致在实验中发生了错误的酶切和连接。虽然GGATCC并不是理想的KpnI酶切位点，但由于GGATCC与GGTACC有相似的序列，可能在一定程度上被KpnI酶识别并切割。这种情况下，片段虽然没有按预期的方式被切开，但仍然能够与载体连接上。这种情况的发生可能是由于酶切位点设计时的误差或实验操作中的错误导致的。在设计引物时，建议

3 回答1275 围观

问IL-1β诱导细胞炎症模型

dxy_mqg1dtg8

在建立IL-1β诱导的细胞炎症模型时，无血清培养基可以降低背景炎症反应，减少干扰因素，使实验结果更加准确。因此，无血清培养基在这种情况下是更为常见的选择。如果使用无血清培养基，添加药物逆转后，应继续使用无血清培养基进行后续处理和加药。因为血清中可能存在一些未知因素，可能会影响药物的逆转效果。如果需要使用含血清的培养基，则需要在实验前对血清进行筛选，选择质量稳定、背景低的血清才能保证实验结果的准确性

4 回答946 围观

问SiRNA

dxy_mqg1dtg8

si-GAPDH阳性对照的敲低率可以通过以下公式计算：敲低率 = (GAPDH-siRNA处理组的表达水平 - 对照组的表达水平) / 对照组的表达水平在计算敲低率时，通常将GAPDH视为内参基因，也就是用来进行数据归一化和相对定量的基因。因此，对于si-GAPDH阳性对照实验，我们会将GAPDH作为目的基因，将GAPDH-siRNA处理组和对照组的表达水平进行比较，以计算敲低率。

3 回答1301 围观

问食管癌差异基因表达

dxy_mqg1dtg8

根据这些结果，我们可以得出以下解释：1.A基因的过表达促进了食管癌的增殖，并抑制了食管癌细胞的凋亡。这可能是因为A基因参与了调控细胞增殖和凋亡的信号通路。2.下调A基因的表达导致了相反的效果，即抑制了食管癌的增殖并促进了细胞凋亡。这表明A基因在食管癌中可能起到了促进肿瘤发展的作用。3.B基因的沉默可以抑制食管癌的表达，这可能是因为B基因参与了抑制肿瘤细胞增殖和促进凋亡的信号通路。过表达B基因并没有

3 回答319 围观

问关于促癌基因诱导甲基化的药物。

dxy_mqg1dtg8

1. 甲基化剂SAM（S-adenosylmethionine）：SAM是一种重要的甲基供体，在细胞内与DNA甲基转移酶结合，促进基因的甲基化。2. 某些类固醇激素（如地塞米松）：研究表明，某些类固醇激素可以促进DNA甲基化，可能是通过影响DNA甲基转移酶的活性来实现。

3 回答958 围观

问求助 |将目的基因敲低或过表达下游炎症因子都降低 raw264.7

dxy_mqg1dtg8

这种情况可能是由于目的基因的不同表达水平对细胞信号通路产生了不同的影响。当敲低目的基因时，可能会降低该基因参与的某些信号通路的活性，从而导致促炎因子的下降。而当过表达目的基因时，则可能增强了该基因参与的某些信号通路的活性，从而导致促炎因子的下降。

3 回答842 围观

问求助TEV蛋白酶菌株或者质粒求助TEV蛋白酶菌株或者质粒

土井挞克树

我们实验室可以提供tev质粒。

3 回答622 围观

问LPS诱导炎症相关问题

loveliufudan

您的实验结果是合理的，并且很好的证明了您所构建的炎症模型是成功的。LPS是一种诱导炎症的刺激因子，不同的细胞类型对LPS的敏感性不同，因此不同的细胞类型可能对LPS具有不同的反应。您的实验结果证明，当LPS浓度为0.1时，细胞增殖和炎症因子表达都最高，这说明这个细胞类型对0.1浓度的LPS敏感。而随着LPS浓度的增加，细胞增殖开始减少，这可能是由于LPS浓度过大对细胞造成了毒性，从而降低了细胞的生

4 回答5430 围观

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