小鼠被根神经节（DRG）取材后提取蛋白做WB，大概个数和质量，以及RIPA裂解比例多少比较合适呢？

做wb一般需要1个小鼠被根神经节。加入RIPA裂解液12孔板100ul/孔，6孔板200ul/孔。

在根神经节（DRG）取材后，提取蛋白质进行Western blot（WB）实验时，可以遵循以下建议：

1. 样本个数：由于DRG的数量较小，通常每个DRG可用于3-4个WB实验。在实际操作中，可以根据实验需求调整样本个数。

2. 蛋白提取质量：提取的蛋白质质量对于WB实验的成功至关重要。确保使用RIPA（Radio Immunoprecipitation Assay）裂解液或其他适当的裂解方法，以获得充分溶解的蛋白质。同时，保证蛋白质浓度在5-20μg/μL之间，以便于上样和检测。

3. RIPA裂解比例：通常，RIPA裂解液的推荐比例为50mM Tris-HCl, pH 7.4；150mM NaCl；1% NP-40；0.5% SDS；0.1% deoxycholate。实际使用中，可以根据实验需求和样本量调整裂解比例。例如，可以将裂解液浓缩，以便减少体积；或者增加SDS浓度，以增加蛋白质溶解度。

4. 蛋白定量：在进行WB实验之前，建议使用BCA或其他方法对蛋白质样品进行定量，以确保样品浓度适当。

5. 抗体浓度：WB实验中，抗体浓度也是一个关键因素。根据抗体说明书和实验经验，选择合适的抗体浓度，以便获得最佳信号。

6. 洗涤和孵育条件：WB过程中，确保充分洗涤以去除非特异性结合，同时适当控制抗体孵育时间和温度，以获得最佳结果。

实际操作中，可以根据实验需求、样本量和设备条件进行调整。

取材后一般是1:100的裂解比例。

[1] 配置裂解液mix，20mg颌骨/1个6孔大约需要100uL裂解液（以碧云天RIPA相关产品为例）。按照RIPA(强) : PI(蛋白酶抑制剂, 50×): PAI(磷酸化蛋白酶抑制剂, 50×) : PMSF(100×) = 95:2:2:1配置。[2] 组织：取小鼠颌骨，液氮中研磨成粉末，期间需保证液氮不完全挥发，迅速转移至1.5ml Ep管中。或研磨仪中研磨至匀浆，注意间断降温（模块提前-20℃冷冻，频率调低，每30s停下来冰浴）。加入100ul裂解液mix。细胞：PBS洗3次→加裂解液mix→刮→吹打→转移至1.5ml Ep管中。[3] 超声清洗箱中，冰上超声裂解细胞30min。或超声破壁机10cycle（1s on 2s off，25%功率），冰上裂解30分钟（每5min震荡混匀1次）。[4] 离心，4℃，10000rpm，10min。[5] 吸取上清（此步可吸取定量104uL或100uL，后续不需要再测量体积）至新的EP管，置于冰上（若暂不变性，可储存在-80℃）。