我要登录|
免费注册
|
我的丁香通
- 企业机构：
- 成为企业机构
- 个人用户：
- 个人中心
移动端

大家都在搜

0 人通过求购买到了急需的产品

免费发布求购

发布求购

实验问答

28,517,674 科研人在看

问如何在核酸扩增中减少污染现象？

迟C迟

样本间交叉污染：标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染；标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染。 PCR试剂的污染：主要是由于在PCR试剂配制过程中，由于加样枪、容器、双蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染。PCR扩增产物污染：这是PCR反应

3 回答653 围观

问琼脂糖凝胶电泳冰上进行是不是可以防止电泳缓冲液过热导致的条带拖尾？

迟C迟

琼脂糖凝胶电泳没必要在冰上进行，只要样品没问题，没降解没污染，一般条带也不会拖尾。

5 回答1089 围观

问分子克隆实验中出现很少或者没有转化子的原因是什么？

迟C迟

考虑以下几个原因：1、抗生素有没有用错，检查载体抗性。2、转化过程是否成功，电激转化还是化学转化，转化条件是否正确。3、感受态细胞是否可用，有没有低温保存，是否在操作过程中失活，实在不行建议买商业化感受态细胞。

4 回答3097 围观

问磁珠法核酸DNA提取里常用的磁珠有羧基和羟基磁珠，两个有什么区别吗？

bamboopiggy

多亏你问这个问题，我才能学到：常用核酸提取结合液，PuriMag Si-OH磁珠和PuriMag Si-COOH均能对核酸有效吸附。一般来说，在离液盐体系，PuriMag Si-OH磁珠对核酸吸附效果相对较优；在PEG体系，PuriMag Si-COOH对DNA和RNA吸附效果相对较好。不同尺寸磁珠，悬浮差异明显，尺寸越小悬浮性越好，但磁响应会减弱。一般用于核酸含量较低的小样本，选用悬浮性好的磁珠

3 回答5441 围观

问核酸电泳出现这种弥散条带是什么原因

未来9

PCR条带弥散原因 1、 PCR 体系中存在污染 2、电泳槽中电泳缓冲液不净 3、电压不稳定 4、如果 PCR 的模板是经过酒精提取的质粒等相关 DNA,则酒精没有除净 5、退火时间过长或过短

5 回答5417 围观

问提取的基因组DNA有降解，为什么？

bamboopiggy

你是不是裂解细胞的时间长了，把genomic dna一起裂开了？建议优化一下裂解时间。

3 回答4384 围观

问DNA ladder能当marker使用吗

bamboopiggy

DNA ladder就是marker啊，不同的地方叫法不一样而已。

3 回答1513 围观

问设计引物的小技巧除了从TM值，GC含量，专一性（基因特定区域）考虑，还有别的吗

bamboopiggy

看你的目的了，如果是realimte的引物，还需要跨内含子。普通pcr的话，还要看酶切位点。

3 回答555 围观

问提基因组DNA的时候脂肪过多，怎么去掉呢

bamboopiggy

裂解细胞以后，将小心将脂肪层下面的液体吸出，再进行提取

3 回答360 围观

问提RNA的时候，有的步骤是加完trizol直接加氯仿，有的是加完trizol后离心吸取上清再加氯仿，这两种方式有差别吗

bamboopiggy

加完trizol以后，直接加氯仿就好，反正也要离心。加了trizol后，离心，是为了去除没有被trizol裂解的组织，再加氯仿，还是要离心的。

3 回答804 围观

问在提取RNA或者蛋白质粉时候，用匀浆机进行匀浆更好还是超声更好？

未来9

感觉没有太大差别！超声做起来简单方便，不用清洗匀浆器

3 回答377 围观

问加入竞争探针后，游离探针条带变弱，请问这是什么原因呢？

Eason老歌迷

加完竞争的探针,应该都是阳性带变潜或者不出现的,你那种状况可能是:1. 加竞争探针时候加错了又把标记的探针加了一边2.如果没有,你在重复一下实验,有时候在封闭和洗涤的时候整个膜不是很均匀,就会出现在某个部位出现比较深的背景, 有可能刚好是在竞争的地方出现的,我以前做过不少EMSA实验,不均匀经常发生,试着重复一下看看结果!

3 回答631 围观

问请问原代培养的细胞转染需要注意什么?

天一湖医者

1.细胞接种：一般做转染前一天接种/铺板（细胞计数大约undefined10^4cell/ml），使做转染前细胞密度在30-50%；如果细胞是原代细胞，接种密度可以密一些，细胞计数在undefined10^6cell/ml；悬浮细胞可以在转染当天接种/铺板（细胞计数大约undefined10^4cell/ml），待细胞状态稳定后做转染前细胞密度30-40%。2.为了能在使用时有较好的转染效果，第一次使用建议您用24孔板做，每孔2ul转染试

4 回答1786 围观

问在做cas9的反转录扩增，使用哪种反转录酶，更容易扩增出来？有没有做过的朋友

天一湖医者

所选试剂在扩增过程中应产生较高且一致的cDNA得率，以获得具有高灵敏度和低变异性的基因表达结果。可考虑预混液形式的逆转录酶用以可以减少实验误差。

3 回答724 围观

问WB时，染糖基化，感觉条带整体上移，另一张膜actin位置正常，这是怎么回事？？

迟C迟

目的蛋白存在翻译后修饰，需要查询数据库及文献资料，了解目的蛋白是否存在翻译后修饰，例如磷酸化、糖基化、泛素化修饰等，这些均可能影响条带的位置。翻译后剪切：许多蛋白首先是以前体形式合成，之后通过剪切形成活性形式，大小也随之改变。例如 Human IL-1β 前体蛋白（precursor），经过 CASP1 酶剪切后，形成 Human IL-1β 蛋白。目的蛋白可能存在多种异构体（Isoform），同

4 回答681 围观

问提取小老鼠rna,如果rna量过大，应该怎么溶解？

bamboopiggy

用DEPC水或无酶无菌水直接溶解就好，溶解完了，分装保存。注意测浓度的时候，要在机器的浓度范围内，否则会出现很大偏差。

3 回答1160 围观

问为什么我的扩增产物滞留在加样孔中!

dxy_ck6nxntw

在加样孔没有跑，电泳的电压不够也是原因，或者胶的浓度和电泳液浓度不一样，或者你的胶正负极放反了。

5 回答2414 围观

问加好的PCR预混液（有聚合酶，没有探针、引物、模板）可以四度冰箱过夜吗。

迟C迟

可以的，现在商业化的酶还是比较稳定的，我们实验室也常预混放四度，当然长时间保存还是建议-20或者-80℃保存。

3 回答1063 围观

问PCR条带时好时坏是引物坏了吗

迟C迟

请问是什么问题？扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅常见的原因在于您的反应体系是PCR的反应体系而不是RT-PCR的反应体系与反应起始时RNA的总量及纯度有关建议在试验中加入对照RNundefined一链的反应产物在进行PCR扩增时，在总的反应体系中的含量不要超过1/1undefined建议用Oligo(dT)或随机引物代替基因特异性引物（GSP）用于一链合成。由于RNA模板存在二级结构，如环状结果，有可能导致GSP

3 回答964 围观

问这个免疫组织染色的图怎么看

balalaLy

第二排是第一排方框内的放大图，检测两个实验组中目的蛋白Lrp5的表达情况。棕色表示蛋白阳性染色。表达量的统计一个是可以算阳性细胞的数量，一个是可以看阳性染色的强弱。这个图是看阳性染色的强弱。

2 回答901 围观

关于丁香通

公司信息

个人用户

企业机构

无忧采购轻松科研

提问

扫一扫

领取干货资料

反馈

TOP

打开小程序