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WB电泳条带弥散不清
bamboopiggy
这个明显是你蛋白浓度高了,你减少一下上样量,20-25ug就够了,不用上太多。太多了,到下面,就压不平了
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求教!小鼠丘脑定向注射给药如何不容易反流?
天一湖医者
小鼠丘脑定向注射给药具体方法及步骤,希望可以帮到你。
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问
购买之细胞冷冻管经解冻后,为何会发生细胞数目太少之情形?
Keven轩
大多是因为在冻存以及复苏的时候,DMSO对细胞产生了毒性,导致细胞死亡,或者是低温导致细胞内液结冰产生冰晶损伤,建议使用全血清和DMSO作为冻存液,并且“慢冻快复”。而且刚复苏时离心转速可以高一些
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问
大鼠原代施万细胞分离培养如何进行?
Eason老歌迷
目前最简便、快捷分离纯化施万细胞的方法是差速贴壁法,即根据不同细胞在培养器皿上贴壁速度的差异,去除成纤维等污染细胞,以获得高纯度施万细胞。细胞经0.125%胰蛋白酶消化后,制成单细胞悬液,置于未覆层的培养皿中,37℃,5%CO2孵箱中培养30min后,将未贴壁的细胞悬液转种于另-未包被的器皿中,30min后重复以上操作,最后将未贴壁细胞按照合适的密度接种在多聚赖氨酸或Laminin包被的培养器皿中
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问
为啥我的内皮细胞长的好慢呢?培养基用内皮细胞专用培养基,还把血清加到了百分之十,可都十天了还是不能传代。
未来9
内皮细胞长的很慢的原因可能有:传代的细胞密度太小;换液间隔时间长;查看是否有污染;细胞消化过度。
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问
您好,请问怎么hoechst染液检测?hoechst有好几种,该用后面是哪一种编号的呢?
Eason老歌迷
1.对于固定的细胞或组织:a.对于细胞或组织样品,固定后,适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色,则先进行免疫荧 光染色,染色完毕后再按后续步骤进行 Hoechst 33342染色。如果不需要进行其它染色,则直接进行后续的Hoechst 33342 染色。 b.对于贴壁细胞或组织切片,加入少量Hoechst 33342染色液,覆盖住样品即可;对于悬浮细胞,至少加入 待染色样品3倍体积的染
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问
细胞加药或者换液后突然全部死亡,都裂解掉了,换液前贴壁贴的挺好的,试过别的细胞系,换过孔板,也有出现这种状况,这是为什么呢?
Keven轩
可能是你加胰酶的量过多或者浓度过大,细胞消化过度,而且吹打混匀过多导致细胞裂解。而且下次加药的时候可以从培养皿边缘加药,且不要用力将液体大下
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问
最近复苏了一支新的细胞,第二天还好好的,传了一代,再过两天液体就变黄变混浊了,还有大片的细胞脱落,不知道是什么原因造成的
zhguxu2001
毫无疑问是污染如果无污染,无论如何不会混浊培养液变黄,是细菌真菌病毒等过度消耗营养物质
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问
DNA和RNA核酸稳定性问题
迟C迟
qPCR实验中的DNA模板直接用ddH2O稀释就好了,不要用TE buffer,里面有盐离子,会影响PCR效率。
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细胞活性氧试剂盒荧光检测
迟C迟
看你的实验步骤没什么问题,应该就是细胞活性氧试剂盒检测的问题,建议换试剂盒。
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求助!请教!小鼠肺 肾脏HE染色分析!谢谢各位老师!
bamboopiggy
丁香小程序里,我不知道怎么放大你的图,太小了,我看不太清楚,只能说,你造模后,损伤了肺泡上皮细胞,造成了肺大泡,然后加药后可以rescue。至于肾脏,Sham组看着肾组织结构正常;CLP组肾小管上皮肿胀、刷状缘缺失、空泡变性、小管坏死、管型形成(这个是猜的,我看不清楚);加药后肾组织损伤程度rescue了一下
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问
请问大家常用于亚细胞定位做内质网标记都有哪些?
bamboopiggy
ER-Tracker™ Green (BODIPY® FL Glibenclamide),或者用ERp72 ,PDI 抗体都可以
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问
为啥我做的胶有这个东西,是玻璃漏胶吗?
Miracle星
1)每次电泳完后,洗净玻璃、胶条和其它附件,下次用之前,用75%酒精擦拭玻璃和胶条,能有效防漏,且利于剥胶。 2)避免玻璃边缘(与胶条接触处)破损很重要,尤其是下面和胶条接触的地方 3)关键是找一块很平的桌面,使两块玻璃底面非常齐就行了 4)胶条一定要干,跑完电泳后,胶条就放在实验台上晾着。 5)下面的胶条注意不要老化,如果有裂纹的话用保鲜膜垫在上面,也可以有效防止漏胶,或者反过来用。 6)玻璃在
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请问如何防止植物原生质体细胞贴壁生长?
迟C迟
用缓冲液轻轻吹打,混合均匀再吸取转移,千万手法要轻,原生质体失去细胞壁非常脆弱。或者可以多做几管,只要收集到你够得细胞数量就可以了。
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问
WB做的表面蛋白,总是有两条条带
Miracle星
估计跟常温放置有关系,要是多余的那个条带比你的目的蛋白条带小的话,那么可能就是目的蛋白降解了,你可以重新电转再杂交试试。电转后的膜最好要4℃保存。而且,你也可以查查目的蛋白的相关资料,看这个蛋白是不是有不同的多聚体形式,也有可能是这种情况导致的。
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做蛋白与蛋白免疫共沉淀时,前提必须得是使用高表达目的蛋白和诱饵蛋白的细胞株嘛?
Miracle星
免疫共沉淀既可以用于检验已知的两个蛋白质在体内的相互作用,也可以找出未知的蛋白质相互作用,不管是两者的哪个,其原则都是一样的,都需要用特异性的抗体与其中的一种蛋白质结合,之后通过蛋白质A或蛋白质G-琼脂糖微珠将复合物沉淀下来,然后用SDS-PAGE鉴定。 免疫共沉淀中设置正确的对照非常重要,因为该方法可能出现假阳性的概率比较高,设置的对照包括:在对照组中使用对照抗体,以缺失目的蛋白的细胞系作为阴性
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细胞体外放置多久仍可染色?
Keven轩
四度条件下12h应该没问题吧,时间再长就不行了
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问
请问跑出这样的条带是怎么回事?
Keven轩
有些不太整齐,应该是配胶没有均匀吧
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问
各位大神救命!帮我看看这是什么污染?应该如何防治?
bamboopiggy
感觉你还是重新提吧,这个是细胞间常见的真菌污染,感觉很难清除掉。再提的时候,注意无菌操作
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问
细胞冻存使用培养液可不可以
Guoood
用10%DMSO的全培冻存细胞就可以了,如果细胞比较珍贵也可以用纯血清冻存,而且还可以考虑用商品化的冻存液也有不错的效果。全程保持无菌操作,不需要加抗生素。
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