加入竞争探针后，游离探针条带变弱，请问这是什么原因呢？

加完竞争的探针,应该都是阳性带变潜或者不出现的,你那种状况可能是:1. 加竞争探针时候加错了又把标记的探针加了一边2.如果没有,你在重复一下实验,有时候在封闭和洗涤的时候整个膜不是很均匀,就会出现在某个部位出现比较深的背景, 有可能刚好是在竞争的地方出现的,我以前做过不少EMSA实验,不均匀经常发生,试着重复一下看看结果!

可能是蛋白可能跟探针不结合。

一般固定蛋白浓度，而提高探针浓度，以做竞争实验

要知道自己要研究的转录因子的结合序列，之后按照结合序列的5'和3'端各加两个碱基（目的基因上的）就可以了。好像为了更稳定结合可以在两侧多加几个。如果要设计突变的话就把突变点放在中间。