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        PCR条带时好时坏是引物坏了吗

        相关实验:逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR,rtpcr)

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        dxy_f0c4hqe0

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        3 个回答

        user-title

        迟C迟

        有帮助

        请问是什么问题?

        扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅
        见的原因在于您的反应体系是PCR的反应体系而不是RT-PCR的反应体系


        链的反应产物在进行PCR扩增时,在总的反应体系中的含量不要超过1/10
        链合成。由于RNA模板存在二级结构,如环状结果,有可能导致GSP无法与模板退火;或SSⅡ反转录酶无法从此引物进行有效延伸。

        a. 将一链的反应温度提高至50℃。
        b. 使用随机六聚体代替Oligo(dT)进行一链反应。

        产生非特异性条带




        产生弥散(smear)条带
        链产物的含量过高




        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        1.可能是引物降解了,2,可能是你的genomic DNA 降解了,3,可能是pcr仪坏了,注意一下,是不是不好的条带,都出现在一行或一个区域。

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        1.模板可能部分降解了.可以检测下,重新用母液稀释使用液

        2.还有就是pcr仪.是否正常检修,连续使用可能造成不稳定的

        ad image
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