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实验问答

28,535,733 科研人在看

问在质粒的双酶切以及回收中，为什么DNA的甲基化程度会影响核酸限制性内切酶的活性？

未来9

DNA甲基化以后，就不再被限制性内切酶识别和切割。

3 回答2081 围观

问请问胶的边缘为什么会弯，下次如何避免

未来9

会不会是有点漏胶玻璃板要洗干净，注意固定好玻璃板

3 回答634 围观

问内质网分离的条件，速度和时间是多少呀？

dxywode

如果只是从内质网中提蛋白的话,你超3到4个5s左右就行了,其实如果用比较强的lysis组合,不用超声,votex估计也差不多了.

4 回答1727 围观

问人体异种移植性肿瘤移植过程中如果出现针头刺伤会不会转移到自己体内？

balalaLy

正常来讲人体的免疫系统会把带入人体的肿瘤细胞杀死，裸鼠成瘤的一个原理也是因为裸鼠的免疫缺陷特征。不过凡事都有例外，做实验保护自己和周边人最重要，出了问题尽快上报老板，该就医的就医。

3 回答610 围观

问image j的Fiji版本电脑使用不了是为什么？

天一湖医者

可能的原因是文件的路径包含中文名称

3 回答1783 围观

问为什么rna酶活性稳定，很难被破坏，煮沸，高压灭菌都不能破坏它？

bamboopiggy

RNase，尤其是属于 RNase A 家族的那些，是相当小的、紧凑的蛋白质，含有几个半胱氨酸残基，可形成许多分子内二硫键]。因此，变性的 RNase 在没有变性剂的情况下冷却至室温后往往会恢复其天然结构和部分功能。在冻融循环甚至高压灭菌后，RNases 可以保留大量活性。

3 回答6082 围观

问磁珠法植物DNA提取试剂盒提取的核酸，纯度只有1.1左右，是什么原因？应该如何调整？

bamboopiggy

你的去蛋白液和漂洗液中是否忘记入无水乙醇？或者是你组织液氮研磨不充分？

3 回答722 围观

问DNA的提取过程中不小心加入其他物质，那DNA的结果会有所不同吗？会有差错吗？

Topmicro

需要看你加入了什么物质，是否会降解DNA？是否会影响DNA的溶解度？在哪一步加入的？具体物质需要具体分析。

5 回答544 围观

问做双酶切原本质粒大小3400多bp，两酶切位点之间的片段40多bp，为什么切下来跑胶只有2000多bp，不应是3000多bp么？

dxywode

提得好的质粒应该绝大部分是超螺旋的，跑得比marker的线性条带快。如果你5K的质粒真跑到5K的位置，才是没提好呢。想确定质粒的分子量最简单的办法是用单酶切成线性分子，再和marker比较。

5 回答472 围观

问构建好的载体双酶切后，出现四条带，有哪位大佬知道什么原因吗?

天一湖医者

有没有注意到这四条带分别有多大，有两条带肯定是你的载体和目的片断，其余两条是什么就不清楚。也有可能是污染，或者是质粒提取出现问题，你的质粒有没有问题。

3 回答1677 围观

问请问大肠杆菌DH5Α和XL1BLUE质粒承载力有多少？

bamboopiggy

说明书上说的是10^8 cfu/ug的DNA，它是用puc19质粒测试的。

4 回答525 围观

问细胞冻存液怎样配置，不同的配方有什么区别吗？

bamboopiggy

只要有血清，有5-10%的dmso，每个实验室的配方都不太一样。有的喜欢直接血清加dmso，有的是完全培养基血清dmso，有的认为完全培养基里有双抗。提议用单纯培养基加血清加dmso，看实验习惯，其实只要能复苏活了，哪种都行

3 回答4546 围观

问PDB序列氨基酸残基和末端修饰

bamboopiggy

lol，如果二楼可以的话，您也可以参考一下这个帖子：https://www.novopro.cn/articles/201804241174.html

3 回答1340 围观

问qPCR产物跑胶电泳条带弥散，条带大小为一百多bp，尝试更换qPCR的条件以及电泳条件，结果依然如故，不知道什么原因

琴妞313

可能是引物浓度不对，建议重新定引物

6 回答1628 围观

问基因转录时两条链均可作为模板链吗？转录过程需要注意什么？

天一湖医者

DNA的两条链不能同时作为转录的模板链。

4 回答3147 围观

问这个免疫共沉淀的图怎么看，我知道结果，我想知道怎么分析的。谢谢各位了

bamboopiggy

简单说一下，上面两个band是IP样品的结果，下面的是total input，也就是whole cell lysis 跑的。total input 可以看到his和flag的那俩蛋白只要加进去就有表达。然后看ip的，用his去拉的，如果加入了lrp5-flag 就可以拉下来，说明两个有相互作用，在有TGF-β1的情况下，TβRI-his表达增加，但是加入lrp5-flag后，TβRI-his的表

3 回答972 围观

问双标记探针QPCR问题

dxywode

出现非特异扩增或引物二聚体：反应体系内模板浓度太高以及模板核酸质量较差，可能导致出现抑制 PCR 反应的现象。在绝对定量时表现扩增效率大于110%。解决方案：去除模板浓度最高的反应孔并重新分析标准曲线；对目的基因做标准曲线，一般用质粒做梯度稀释，或用 PCR 产物做梯度稀释，然后做定量扩增，通过曲线评估反应效率。绝对定量有效的扩增效率在 90%-110%；重新纯化模板，去除模板中存在的潜在抑制物。

3 回答811 围观

问怎样解决PCR复合扩增中的扩增不平衡的问题？

dxywode

通过向原有PCR反应体系中加入PCR添加剂，来降低双螺旋DNA的稳定性，从而解决等位基因扩增不平衡的问题；所述原有PCR反应体系为所述对待测等位基因进行PCR扩增出现等位基因扩增不平衡情况时所采用的PCR反应体系。实验证明，该方法确实可以有效的解决由于“部分待测等位基因在PCR扩增过程中解链形成复杂二级结构或/和DNA双链解链不充分”而导致的等位基因扩增不平衡。

3 回答980 围观

问直扩型核酸检测，不用核酸提取步骤，这么方便的话，为什么没有大批量的替代传统的柱式法/磁珠法DNA提取？有什么弊端呢？

bamboopiggy

1.直扩适用于哪些DNA样品？2.直扩时间短、效率高，为什么没有在这次新冠检测上大批量铺开？3.直扩和传统DNA提取有什么区别和优劣其实直扩型相当于是菌落pcr，dna的得率和纯度不够。结果假阴性假阳性都可能出现。你也就知道为什么没有大面积铺开了。直扩型适用于genotyping等样本量多，只需鉴定有或无，大或小的实验。传统dna提取，适用于pcr产物回收，进行连接，转化的。

2 回答1588 围观

问柱式法核酸提取和磁珠法核酸提取原理都差不多，只是固定项不一样，那么二者的裂解、结合清洗一套试剂是否可以互换通用？

bamboopiggy

原理是一样，但是不建议你互换或者是混合使用试剂，因为公司给的试剂，都是配套的采取了最优化的PH和盐浓度。并且硅胶柱法核酸的回收效率高、纯度好，而磁珠法适合于低浓度核酸的提取，只是通量大。你二者混用也没啥意思啊。

2 回答1687 围观

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