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        双标记探针QPCR问题

        相关实验:多重 PCR 扩增实验

        user-title

        Lee_xsht

        Fam Vic双标记探针做QPCR时,Vic扩增曲线成平滑的S型,但Fam曲线有波动,不平滑,基线也有波动,是什么原因引起的?

        wx-share
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        3 个回答

        user-title

        dxywode

        有帮助

        出现非特异扩增或引物二聚体:反应体系内模板浓度太高以及模板核酸质量较差,可能导致出现抑制 PCR 反应的现象。在绝对定量时表现扩增效率大于110%。解决方案:去除模板浓度最高的反应孔并重新分析标准曲线;对目的基因做标准曲线,一般用质粒做梯度稀释,或用 PCR 产物做梯度稀释,然后做定量扩增,通过曲线评估反应效率。绝对定量有效的扩增效率在 90%-110%;重新纯化模板,去除模板中存在的潜在抑制物。

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        可能是你FAM信号的接收器有问题了,因为你vic的结果正常,说明仪器基本正常,但是FAM的信号有改变,说明是和fam相关的东西有问题了。

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        一是扩增信号太弱,经系统矫正后,就产生这样抖啊抖的线,小编建议大家提高模板浓度重复实验。二是仪器本身的问题,可能在扩增过程中仪器

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