实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问请问qpcr和pcr本质的区别是什么？怎样诊断呢？

迟C迟

qPCR是荧光定量PCR，相比普通PCR，会加入染料，便于收集荧光信号。结果可以得出相对/绝对浓度等多组数据，然后根据你的目的，对实际数据进行分析。还能通过ntc的ct值判断实验合不合格。一般需要单独的仪器，像Roche 480。

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问如何在核酸扩增中减少污染现象？

迟C迟

样本间交叉污染：标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染；标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染。 PCR试剂的污染：主要是由于在PCR试剂配制过程中，由于加样枪、容器、双蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染。PCR扩增产物污染：这是PCR反应

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问求大神指点HOK细胞怎么培养

天一湖医者

1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；3、用适量的冻存液重悬细胞，并放置于冻存管中；4、先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃。细

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问琼脂糖凝胶电泳冰上进行是不是可以防止电泳缓冲液过热导致的条带拖尾？

迟C迟

琼脂糖凝胶电泳没必要在冰上进行，只要样品没问题，没降解没污染，一般条带也不会拖尾。

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问分子克隆实验中出现很少或者没有转化子的原因是什么？

迟C迟

考虑以下几个原因：1、抗生素有没有用错，检查载体抗性。2、转化过程是否成功，电激转化还是化学转化，转化条件是否正确。3、感受态细胞是否可用，有没有低温保存，是否在操作过程中失活，实在不行建议买商业化感受态细胞。

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问磁珠法核酸DNA提取里常用的磁珠有羧基和羟基磁珠，两个有什么区别吗？

bamboopiggy

多亏你问这个问题，我才能学到：常用核酸提取结合液，PuriMag Si-OH磁珠和PuriMag Si-COOH均能对核酸有效吸附。一般来说，在离液盐体系，PuriMag Si-OH磁珠对核酸吸附效果相对较优；在PEG体系，PuriMag Si-COOH对DNA和RNA吸附效果相对较好。不同尺寸磁珠，悬浮差异明显，尺寸越小悬浮性越好，但磁响应会减弱。一般用于核酸含量较低的小样本，选用悬浮性好的磁珠

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问核酸电泳出现这种弥散条带是什么原因

未来9

PCR条带弥散原因 1、 PCR 体系中存在污染 2、电泳槽中电泳缓冲液不净 3、电压不稳定 4、如果 PCR 的模板是经过酒精提取的质粒等相关 DNA,则酒精没有除净 5、退火时间过长或过短

5 回答4758 围观

问pcr产物进行琼脂糖凝胶电泳后可以不在凝胶成像仪紫外灯下切胶吗？

bamboopiggy

可以，你可以放个尺子，标记好位置，关了紫外切。

4 回答573 围观

问提取植物DNA时遇到多糖成分的干扰， DNA质量一直不高，如何消除多糖的影响？

迟C迟

可以买商业化的试剂盒，针对多糖含量高的植物样本的。

3 回答1271 围观

问能否用本试剂盒提取酵母中的基因组DNA？

bamboopiggy

您所谓的本试剂盒，是哪个试剂盒啊？一般能提取细胞和组织的genomic DNA的试剂盒，可以用来提取酵母的genomic DNA

3 回答437 围观

问提取的DNA中有RNA污染，为什么？

bamboopiggy

你提取DNA的buffer里面，第一步重选细胞的液体里面有没有加RNase？需要加RNase的

4 回答4751 围观

问提取的基因组DNA生物活性差，为什么？

bamboopiggy

你用基因组dna来做，可能量比较低，最好把你需要测活性的那个片段克隆出来做。

3 回答432 围观

问提取的基因组DNA有降解，为什么？

bamboopiggy

你是不是裂解细胞的时间长了，把genomic dna一起裂开了？建议优化一下裂解时间。

3 回答3490 围观

问质粒dna提取失败原因是什么

Keven轩

一般按照试剂盒来都没有问题，没提出来可能是质粒根本没转进去，或者操作问题

6 回答1599 围观

问麻烦各位老师帮忙看一下，这个36Kid出来是这样的，什么原因？转膜时候时间到的时候中间拿出来时候膜上没有印到蛋白，出来就是这样

bamboopiggy

可能是你转膜的三明治夹心没有做好，膜和胶没有接触好。

2 回答501 围观

问扩增得到的DNA条带弥散，是引物问题吗

Wuwuy

扩增得到的DNA条带弥散，是引物问题吗？考虑是不是跑完的胶在室温放了很久，或者4度过夜再拍的，一般这种情况拍下来是会弥散的。

6 回答478 围观

问逆转录的CDNA要测浓度吗

bamboopiggy

一般没有人去测cDNA的浓度，因为你同一批rna调整浓度后，同一批次做的反转录认为反转效率是一致的，并且跑realtime以后，可以用内参来继续调整。

4 回答4355 围观

问用DH5a转化的时候除了42度热激1分钟，再一小时复苏是不是还有别的方法？

lzy必有我师

热激时间的确定与装感受态所用的离心管厚度有关系，所以你会看到不同的说明书上介绍的热激时间不一样，你可以自己做个梯度试一下，一般来讲30-90s之间都是可以的，当然转化率有些许的差异

7 回答3928 围观

问用cDNA扩增一个5000+bp的基因扩增不出来，实验室已有的各种酶都试了，另一个同时扩增的2000bp基因扩增出来了

Wuwuy

用cDNA扩增一个5000+bp的基因扩增不出来，实验室已有的各种酶都试了，另一个同时扩增的2000bp基因扩增出来了。5000直接扩太长了，也很容易出错，一般师兄师姐的做法是分成几段扩，并且测序检测是否有错

8 回答627 围观

问这个免疫组织染色的图怎么看

balalaLy

第二排是第一排方框内的放大图，检测两个实验组中目的蛋白Lrp5的表达情况。棕色表示蛋白阳性染色。表达量的统计一个是可以算阳性细胞的数量，一个是可以看阳性染色的强弱。这个图是看阳性染色的强弱。

2 回答561 围观

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