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问
各位老师我想问一下WB电流大小是与膜的面积有关吗? 这怎么算膜的大小面积?然后用多少ma电流啊?
bamboopiggy
你是说转膜的电流吧?这个和你的机器有关系,和你膜的面积的大小关系不大,你买的是湿转的,还是半干转的?问买的业务员,可以用多大电流。
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问
想请教一下各位大佬,胶倾斜是什么原因呀?
bamboopiggy
你灌的不匀,所以积层胶和分离胶之间没有压住
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问
如何证明三个蛋白能形成三聚体?
bamboopiggy
首先用co-ip,a能拉下b和c来,b能拉下a和c来,c能拉下ab来,然后跑native 胶,三聚体的大小应该是三个蛋白分子量的总和。
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问
PCR中的CT值问题
balalaLy
逆转录酶反复冻融或者使用过程中没有确保在冰上进行会使酶活性降低,内参的CT值会升高,导致实验结果出现相反的方向。
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问
亲和标记法和膜重建法鉴定膜上蛋白质是否为膜转运蛋白的方法?
whilt-shirt
可以选用荧光标记或者His探针试试
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问
挑取单克隆时重组单克隆有没有一定的特点,和空质粒不一样的那种
Eason老歌迷
单克隆筛选是根据细胞所具有的特性将单个细胞从混合的细胞样品中分离出来的⼀种技术,是抗体制备细胞株优化、稳转细胞株构建、药物靶点筛选等应⽤中重要的⼀环。具有以下特点:通用性筛选:适用于多种细胞,无需携带抗性荧光标签。单列线性模式:适用于高价值细胞。提供克隆性证据:可为每个克隆提供克隆形成图像。温和的微流控技术:更高存活率,更低损失率。
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问
活体成像c57灌胃带荧光菌液必须脱毛么?
balalaLy
一般都会剃毛比较好,毛发会带有背景荧光造成干扰。
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问
求助:od为2的引物稀释方法?
未来9
1nmol用10ul ddh2o稀释,浓度为100um,此浓度为储藏浓度,工作浓度要稀释到10um.订引物时候,填10nmol就可以了,不用管 od
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问
为提取结核杆菌的RNA,如何破壁?
未来9
可以采用超声波联合Trizol法、玻璃珠(简称"玻珠")联合Trizol法(简称"玻珠法")和Trizol法(简称"不加玻珠法"),对结核分枝杆菌进行破壁,提取总RNA
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问
怎么对snp位点引入酶切位点,该点所在序列没有对应的酶切位点怎么办
Eason老歌迷
重组时选择你的目的基因上没有,而质粒的多克隆位点上有的酶切位点,一般重组质粒需要两个酶,所以你要选择两个酶切位点,注意尽量避免使用切出平末端的酶。重组引物设计时首先你要确定你选择的两个酶在的酶切位点在质粒的多克隆位点上的排列顺序,这个不能错,不然序列就会接反。一般设计重组引物的时候,在上游引物5’端前面加上载体多克隆位点排列在前面的酶切位点序列,在下游引物5‘端前面则加上后面的一个酶切位点,酶切位
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问
DNA提取过程中内源性核酸酶如何有效抑制?
lyang556
在提取内源核酸酶含量丰富的材料的 DNA时,可增加裂解液中螯合剂的含量,细胞裂解后的后续操作应尽量轻柔。
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问
最近贴壁细胞传代,胰酶消化到光镜下细胞脱落到大片成团终止消化,吹打离心重悬,但传好的培养瓶里总是有成团的细胞没散开,是什么原因呀
whilt-shirt
这种情况一般是没有完全吹散,建议反复多次吹打
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问
WB跑胶条带跑不开是什么原因呢?
whilt-shirt
有可能是胶的原因,建议选择相应浓度的分离胶
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问
发现细胞里有一些小的团块 贴壁不知道是不是污染了?
Keven轩
应该是真菌污染,及时扔掉然后清洗培养箱
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498 围观
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问
PCR试验中双链互补的问题?
bamboopiggy
在CpG岛两端设计引物进行PCR,pcr过程中,随着pcr引物的延申,T的互补生成A,C的互补生成G,不会不互补
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问
RNA提取结果,遭遇亮区干扰,咋办(・o・)
bamboopiggy
你跑的是动物组织还是植物组织?用的是变性胶还是非变性胶?尝试用RNase处理一下看看还有没有,如果没有,可能是28S降解,如果有,可能是DNA或蛋白质污染。
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问
用BioRad跑RT-PCR,不同的SYBR跑出来的GAPDH会有很大差别么,一个15+一个18+,但是样品差不多,选择哪个
whilt-shirt
可能是试剂的稳定性不太好,建议重新跑一板
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问
想比较多个样本中单个细菌的丰度差异,用什么统计学方法?T检验可以吗?如果样本太多,会不会造成I类错误?
Keven轩
T检验没问题,其他的检验方法合理的都可以
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问
在构建质粒时,菌落pcr的条带都是对的,但是测序结果都是缺少目的基因那一段,这是为什么呢?
汤姆卜丽波
可以做个菌液pcr再看看,有很大可能性是连接产物中有剩余目的基因,也可以单扩一个引物看看是不是引物污染,提个质粒跑一下
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问
我合成了一段序列,公司送来了液体状态的质粒,我做了转化,两天才长出来一个菌落,这个正常吗?
汤姆卜丽波
测一下质粒浓度,然后估计是抗性平板没选择对。
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