实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问为什么rna酶活性稳定，很难被破坏，煮沸，高压灭菌都不能破坏它？

bamboopiggy

RNase，尤其是属于 RNase A 家族的那些，是相当小的、紧凑的蛋白质，含有几个半胱氨酸残基，可形成许多分子内二硫键]。因此，变性的 RNase 在没有变性剂的情况下冷却至室温后往往会恢复其天然结构和部分功能。在冻融循环甚至高压灭菌后，RNases 可以保留大量活性。

3 回答5376 围观

问磁珠法植物DNA提取试剂盒提取的核酸，纯度只有1.1左右，是什么原因？应该如何调整？

bamboopiggy

你的去蛋白液和漂洗液中是否忘记入无水乙醇？或者是你组织液氮研磨不充分？

3 回答517 围观

问DNA的提取过程中不小心加入其他物质，那DNA的结果会有所不同吗？会有差错吗？

Topmicro

需要看你加入了什么物质，是否会降解DNA？是否会影响DNA的溶解度？在哪一步加入的？具体物质需要具体分析。

5 回答321 围观

问构建好的载体双酶切后，出现四条带，有哪位大佬知道什么原因吗?

天一湖医者

有没有注意到这四条带分别有多大，有两条带肯定是你的载体和目的片断，其余两条是什么就不清楚。也有可能是污染，或者是质粒提取出现问题，你的质粒有没有问题。

3 回答1440 围观

问请问大肠杆菌DH5Α和XL1BLUE质粒承载力有多少？

bamboopiggy

说明书上说的是10^8 cfu/ug的DNA，它是用puc19质粒测试的。

4 回答336 围观

问细胞冻存液怎样配置，不同的配方有什么区别吗？

bamboopiggy

只要有血清，有5-10%的dmso，每个实验室的配方都不太一样。有的喜欢直接血清加dmso，有的是完全培养基血清dmso，有的认为完全培养基里有双抗。提议用单纯培养基加血清加dmso，看实验习惯，其实只要能复苏活了，哪种都行

3 回答3989 围观

问PDB序列氨基酸残基和末端修饰

bamboopiggy

lol，如果二楼可以的话，您也可以参考一下这个帖子：https://www.novopro.cn/articles/201804241174.html

3 回答354 围观

问请问提取蛋白原液第一天测BCA后忘记放负80冰箱，4度冰箱过夜，担心蛋白降解，第二天重新测BCA，为什么有的样本蛋白浓度反而升高

whilt-shirt

BCA法本来就存在误差，你这个只能说是误差，并不能说是升高了

3 回答3250 围观

问请问老师跑成这样什么原因呀？

whilt-shirt

胶有问题或者电泳液过期了，建议重新配胶电泳

3 回答170 围观

问在含DNA的滤液中加入嫩肉粉与将含DNA的滤液中放在60～75℃的恒温水浴箱中保温10～15min的原理有什么不同？

bamboopiggy

一个是化学性的，利用嫩肉粉中的木瓜蛋白酶，酶解去除蛋白质。一个是物理性的，利用DNA和蛋白质变性的温度差，将蛋白质变性，而不影响DNA。两者都是为了去除蛋白质。

4 回答220 围观

问qPCR产物跑胶电泳条带弥散，条带大小为一百多bp，尝试更换qPCR的条件以及电泳条件，结果依然如故，不知道什么原因

琴妞313

可能是引物浓度不对，建议重新定引物

6 回答1168 围观

问基因转录时两条链均可作为模板链吗？转录过程需要注意什么？

天一湖医者

DNA的两条链不能同时作为转录的模板链。

4 回答2486 围观

问这个免疫共沉淀的图怎么看，我知道结果，我想知道怎么分析的。谢谢各位了

bamboopiggy

简单说一下，上面两个band是IP样品的结果，下面的是total input，也就是whole cell lysis 跑的。total input 可以看到his和flag的那俩蛋白只要加进去就有表达。然后看ip的，用his去拉的，如果加入了lrp5-flag 就可以拉下来，说明两个有相互作用，在有TGF-β1的情况下，TβRI-his表达增加，但是加入lrp5-flag后，TβRI-his的表

3 回答743 围观

问定量PCR中两步法跟三步法有啥区别？对结果影响大吗？

bamboopiggy

对定量pcr来说：因为产物是短片段，用两步法或三步法影响不大。两步法即循环扩增中设置2个步骤，一个是95度变性，另一个是退火与扩增的温度，一般设置在55~60之间，主要用于扩增短片断，节省时间。三步法就是平常见到的方法，扩增分三步，变性，退火，延伸。时间稍长。

3 回答13103 围观

问细胞IF 4片2组，1个对照组跟实验组对比结果是想要的另1个对照组荧光强度跟实验组对比没太明显。需继续做还是说抗体没有明显表达

bamboopiggy

先确定你的抗体是好使的，找个阳参，否则不能说明你的蛋白没有明显表达

2 回答129 围观

问DNA转录技术需要注意的易错细节有哪些？

Eason老歌迷

所有试剂均用高压灭菌双蒸水配制。用大口滴管或吸头操作，以尽量减少打断 DNA 的可能性。提取 DNA 过程中所用到的试剂和器材要通过高压烤干等办法进行无核酸酶化处理。要用新鲜样品或液氮冷冻-70 度保存的样品。这样通过降低内切酶的活性 DNA 的降解。

4 回答587 围观

问请问大鼠实验，做心肌缺血再灌注的，要打ly294002，用什么剂量，打多久，怎么配液？

bamboopiggy

5% DMSO+ 40%PEG300+5% Tween80+50%ddH2O 现用现配（3mg/mL），但是你可以把ly294002 溶解在DMSO可以达到61mg/ml 的浓度，然后取3mg 大概就是50ul，然后再加PEG300 400ul，50ul的tween80，和500ul的ddH2O，就可以了。注射量可以在50-100mg/kg之间吧。

3 回答568 围观

问磁珠法提取动物组织DNA，晾干时加热效果大吗？

Eason老歌迷

磁珠粒径小，磁含量少；磁性弱，亲水性不够；解决方案：筛选、替换匹配的磁珠。磁性分离器磁场弱，吸磁效果不理想；解决方案：选择高磁性分离设备，或增加磁吸时间。由于裂解不完全，导致样本黏度过大；样品裂解后，释放蛋白、其他杂质将磁珠紧紧包裹，影响磁吸效果。

3 回答700 围观

问直扩型核酸检测，不用核酸提取步骤，这么方便的话，为什么没有大批量的替代传统的柱式法/磁珠法DNA提取？有什么弊端呢？

bamboopiggy

1.直扩适用于哪些DNA样品？2.直扩时间短、效率高，为什么没有在这次新冠检测上大批量铺开？3.直扩和传统DNA提取有什么区别和优劣其实直扩型相当于是菌落pcr，dna的得率和纯度不够。结果假阴性假阳性都可能出现。你也就知道为什么没有大面积铺开了。直扩型适用于genotyping等样本量多，只需鉴定有或无，大或小的实验。传统dna提取，适用于pcr产物回收，进行连接，转化的。

2 回答661 围观

问柱式法核酸提取和磁珠法核酸提取原理都差不多，只是固定项不一样，那么二者的裂解、结合清洗一套试剂是否可以互换通用？

bamboopiggy

原理是一样，但是不建议你互换或者是混合使用试剂，因为公司给的试剂，都是配套的采取了最优化的PH和盐浓度。并且硅胶柱法核酸的回收效率高、纯度好，而磁珠法适合于低浓度核酸的提取，只是通量大。你二者混用也没啥意思啊。

2 回答667 围观

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