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        QRTPCR结果如何分析

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        周末也要努力呀

        做出来CT值之后,如何知道自己的值是不是可以使用呢?比如一个CT值35是不存在呢还是自己的原因没有测出来呢?有什么衡量标准呢?是根据内参的表达量吗?内参一般多少范围内的是正常的呢?总之一句话,就是测出结果如何知道值能不能用呢?感谢

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        6 个回答

        user-title

        秋秋欣欣

        有帮助

        内参值一般在15-20

        其他值一般要在30以内才能用

        若超过30 要确保结果稳定且每个孔差值小才可以

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        灵枢天问

        有帮助

        正常CT一般在18-30之间。不同基因之间表达量差异很大,可达上千甚至上万倍之差,所以CT值差10以内属正常现象,但通常选用内参基因属于表达量较高的持家基因,如果目标基因和内存基因表达量(CT值差)过大,用内参基因来衡量目标基因的表达量(绝对值)就不完全可靠,但至少可以说明目标基因表达非常低。

        user-title

        汤姆卜丽波

        有帮助

        基本上是我内参是GAPDH, CT 18-20,目的基因大约在15-25就可以。如果超过这个范围,但是副孔之间一致那也可以接受,如果有一个特殊那只能把他删掉

        user-title

        balalaLy

        有帮助

        看一下扩增曲线和溶解曲线好不好,如果好的话说明是可以用的,只是这个基因本身表达很低。

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        如果内参在15-25之间,目的基因在35之前,都是能用的

        user-title

        未来9

        有帮助

        Ct 值的含义是:每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数 (cycle)。所以不难推断出 ct 值越小,反应扩增到达平台期所需循环数越少,目的基因起始含量越高。下面我们用一个公式进行推导过程:(敲黑板,重点!)

        PCR 产物量 = 2∧ct * 起始模板量
        起始模板量 = PCR 产物量/2∧ct = 起始模板量 _2∧ - ct

        待检基因起始模板量 = PCR 产物量 _2∧ - ct(待检基因)
        内参基因起始模板量 = PCR 产物量 _2∧ - ct(内参基因)

        由于 PCR 产物量是相同的。两式上下相除得:待检基因起始模板量/内参基因起始模板量 = 2∧-【ct(待检基因)-ct(内参基因)】= 2∧-Δct


        内参只要稳定表达,ct值在15到30应该都可以的。

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