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实验问答

28,550,034 科研人在看

问qPCR实验重复性问题

天一湖医者

是的，首先qPCR不是很准，特别是对于新手来说。其次，三个平行以上才具有统计学意义，三个生物学重复以上才具有生物学意义。（发表文章时需要）最好能够设置3个复孔,同样的实验再重复3次以上才有可信度.不同的孔之间的差异不要大于0.4-0.5为有效,否则肯定是加样过程出了问题.

4 回答23250 围观

问质粒酶切后的回收可以不跑胶直接PCR回收吗？

迟C迟

不可以，直接PCR产物回收的有好几种片段，不是你要的目的片段，会降低后续实验准确性。

4 回答4063 围观

问如何快速地锁定Meta分析的矛盾点?

天一湖医者

参考下这个，讲的很详细，https://baijiahao.baidu.com/s?id=1730794819467226100&wfr=spider&for=pc&searchword=%E5%A6%82%E4%BD%95%E5%BF%AB%E9%80%9F%E5%9C%B0%E9%94%81%E5%AE%9AMeta%E5

3 回答677 围观

问有没有一款软件可以分析多重荧光定量pcr的引物是否会相互干扰及量化干扰程度？

Eason老歌迷

有的，可以参考https://pga.mgh.harvard.edu/primerbank/

4 回答431 围观

问求助，半定量PCR的问题

bamboopiggy

半定量PCR是首先通过确定目标物PCR有限扩增至最大值的最低循环数，进而比较不同样品之间该目标物的PCR扩增产物数量，以此确定样品中目标物的相对数量。也就是说是一个相对值，不是绝对含量。至于第二个问题，完全一样的操作，并不代表完全一样的模版都加进去了，每加一次样，都可能存在误差，甚至没有吸到液体。

5 回答1680 围观

问PCR实验引物设计有什么要求？TM值一般多少最合适？

汤姆卜丽波

1、引物长度一般在15-30bp。常用的为18-27bp，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于Taq DNA聚合酶进行反应；2、引物GC含量一般为40%-60%， 45-55%为宜，GC含量过高或过低都不利于引发反应，上下游引物GC含量和Tm值要保持接近，一般Tm值不超过 5℃。3、引物所对应的模板序列的Tm值在55-80℃之间，最好为 72℃左右。4、引物的延伸是从3′端开始的，不能进行任

5 回答24907 围观

问Pcr模板加的量太多会导致产物多条带，且不亮吗

bamboopiggy

按照你的酶的说明书来加pcr模板的量，加多了，会产生非特异性结合，产物条带多，且不特异。

3 回答4260 围观

问PCR程序设定是根据什么来的？

shanshan2113

pcr程序设定取决于：1.扩增酶的类型，决定变性温度，扩增效率等；2.扩增引物，决定退火温度；3.目的片段大小，决定延伸时间。

5 回答3179 围观

问定下引物的Tm值范围之后即可定下引物的长度范围吗？

shanshan2113

引物Tm值与引物序列GC含量有关，确定Tm值后，若GC含量高，则引物短，GC含量低，则引物长。

4 回答656 围观

问难道引物会突然不适用了吗

balalaLy

引一般引物稀释后保存在-20可以用挺久的，4度的话可能超过一个月就不敢保证了

5 回答613 围观

问rtPCR，药物、对照组设置问题

balalaLy

对，一块96孔板可以跑完。每个指标要分开，不能mix。如果你加样熟练手很稳的话，可以只做2个副孔。

5 回答591 围观

问为什么血型糖蛋白SDS-PAGE电泳时跑得慢？

bamboopiggy

糖基化会影响糖蛋白的预期大小，从而导致其再SDS-PAGE胶中的位置与分子量不一致。血型糖蛋白30000分子量，而红细胞带3蛋白分子量约 95,000～100.00，但是由于糖基化的存在，使得血型糖蛋白的电荷/摩擦系数与带3蛋白接近，所以出现在带3蛋白附近。

3 回答2958 围观

问类器官药敏实验复孔间结果数据频繁差异巨大，考虑原因为类器官大小各异复孔间细胞数差异过大，请教改善方法

天一湖医者

类器官药敏实验复孔间结果数据频繁差异巨大。立体微小组织块培养法成功率高、成本低、出结果快，但样本量极其有限，无法设置复孔求均值数据随机性误差大，无法区分混在癌组织中的正常细胞；PDX能保持人肿瘤原有的组织形态和生物学特性，准确性较高，但动物实验本身会受体内多种不可控因素的制约，接种成功率低、周期长、成本高，且无法实现高通量药筛；类器官技术成本居中，2-3周出结果，能模拟肿瘤细胞3D模式下的生存和增

4 回答839 围观

问请问为什么提取RNA的时候最后没有看到羽毛状沉淀呢？

bamboopiggy

可能你rna的浓度有点低，所以并且那个沉淀是透明的，如果太小了，你可以能看不到，没事，能用就好

6 回答1633 围观

问地贫基因gapPCR电泳条带有粗、细，与标本浓度有关？

棋NKKP

不仅与浓度有关，与样品的质量，胶的质量，核酸染料甚至是电泳条件都有关

6 回答949 围观

问最近酶切连接转化后一直没菌落，一般问题出在哪

棋NKKP

这个涉及的就比较多了，可能载体构建时设计的问题，或者筛选的条件不合适，或者培养条件不合适，或者感受态转化效率低，可以考虑设置对照去检查自己的实验体系

7 回答1245 围观

问可以用于 DNA 差异筛选杂交的探针有哪些？

bamboopiggy

杂交探针是核酸分子上带有可能被检测的信号分子，如同位素或荧光标记的核酸分子。双链DNA加热变性成为单链，随后用放射性同位素（通常用磷-32）、萤光染料或者酶（如辣根过氧化物酶）标记成为探针。磷-32通常被掺入组成DNA的四种核苷酸之一的磷酸基团中，而荧光染料和酶与核酸序列以共价键相连。分为cDNA探针，基因组DNA探针，寡核苷酸探针，RNA探针。

3 回答731 围观

问PCR过程中提取试剂1底物添加对实验过程影响多少？

whilt-shirt

你这个不太好回答，试剂1都不知道是什么

4 回答623 围观

问用NEB的BpuEI酶1ul，切1ug的质粒失败，多加酶也不行，是酶量不够？应该用多少计量？

棋NKKP

酶切体系商业化很稳定，首先要确定自己的酶切位点是不是正确

5 回答1279 围观

问质粒构建中遇到的问题？

棋NKKP

在基因前插入要考虑移码突变的发生，而且不仅仅这一种会导致最终的不表达，还有很多原因

5 回答619 围观

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