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问
切片时内部结构掉出来的原因
未来9
原因有很多:(1) 附贴蜡片未及时烘烤或烤片时间不足.(2) 附贴切片不平.(3) 苏木精反蓝的氨水浓度过高.(4) 洗片时水流过急.(5) 脱蜡二甲苯过凉.(6) 切片过厚.(7) 组织固定、脱水、透明浸蜡等任一过程欠佳.(8) 载玻片有油污等.(9) 有特殊的组织.
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问
PCR过程提取试剂1在常温下可以留多久?
bamboopiggy
如果是DNA的话,室温放个半天一天的没啥大问题。
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问
逆转录实验体系中 RNA 模板的用量与哪些因素相关?
天一湖医者
与浓度,质量,循环次数,样本量等有关
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问
最近在静电纺丝的纤维膜上培养细胞染色后看不到,细胞漏在了比较薄的纤维膜下面,但是比较厚的纤维膜下面和膜上都没有看到,为啥啊
天一湖医者
先把膜润湿,去掉培养基,再用高密度细胞悬液种植,待吸附0.5~2h,待吸附后沿孔边缘。
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问
琼脂糖凝胶电泳拖尾的具体原因有哪些,怎样避免
天一湖医者
原因有以下:1、 可以考虑是不是样品不纯,目的产物与杂带相差不大,所以要多跑一段时间才有尾巴。参考marker,marker应该不会有。如果有的话说明配胶有问题。2 、琼脂糖检测DNA一般去1~5微升原液,加2微升溴酚蓝便可,注意上样浓度;3、可能是原液浓度太大造成的;4、可能DNA已降解。5、在提取前对样品进行一定的脱腐处理呀。很简单。有一种TENP buffer,文献中查的到的。6、 DNA降
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问
PCR反应过程中的假阳性假阴性怎么判读?
bamboopiggy
做好对照,加入阴性对照和阳性对照,就可以判断假阴性假阳性了。
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问
小鼠尾静脉注射和尾动脉注射?
bamboopiggy
不能选择动脉,动脉血是离心的,静脉血是回心的。并且动脉血的压力比较大,静脉血压力小,易于带着药物回心分布全身。
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问
CRISPR/CAS9质粒提取?
天一湖医者
要是你不进行高压灭菌,在那些离心管和枪头中的细菌的DNA可能进入你提取的DNA中,污染你的DNA,造成DNA检测出现错误。
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问
CRISPR/ CAS9 TOP10?
balalaLy
氨苄浓度用100,gelred和goldview都用过,没看出有什么不同的
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问
wb LC3怎么跑才好看啊,我每次跑的都很丑,感觉很弥散,不清晰。
bamboopiggy
用15%的胶,不要跑的太低,大概留住10的marker,就转膜。
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问
多聚赖氨酸包被细胞培养板的具体步骤是什么?
bamboopiggy
你可以配置好多聚赖氨酸将其过滤除菌,分装,待用。培养的前一天包被培养板把多聚赖氨酸加到培养板中,静置15分钟,吸出多余的多聚赖氨酸,然后用高压过的双蒸水洗板,培养板放入37度烘箱里过夜就可以用了
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问
QPCR逆转录问题咨询
bamboopiggy
你可以再补点成20ul体系,加1000ng不就可以了。你加多了rna,可能会影响酶的逆转效率的。
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问
同源重组构载,抗性板上长的菌很少,而且都是假阳性菌
天一湖医者
应该是连接比例,或者载体酶切不彻底,目的片段等的问题,如果担心是自连状况,建议增加一个连接体系中只加载体、不加目的片段的对照,排除自连的问题
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问
农杆菌可以提质粒吗?
天一湖医者
农杆菌可以提质粒。和从大肠杆菌中的一样,260/280应在2.0左右。260/230应该大于2。
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问
双切酶体系中,两个酶的温度不一样,30和37该如何选择呢?
WineQ慕雪
先选择酶切低温要求的,再去酶切高温要求的
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问
单酶切之后用T4连接酶构载,菌长了满板,pcr验证全是空载。
灵枢天问
这个体系是按摩尔比来的么,你测目的基因和载体浓度了么
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问
CRISPR/CAS9质粒转染试剂以及靶位点DNA引物设计?
bamboopiggy
如果你习惯用PEI25K也是可以的,按照你平时做质转的配比做就可以。也可以直接转染你的肿瘤细胞收样做pcr,然后T7E1酶切。至于靶位点的引物,只要在靶位点上下游大概能产生700-900bp的pcr产物就可以。
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问
Tag1酶酶切后失败的原因?
mxy5120
限制性内切酶的量不够。酶切的时间不充足
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问
用自配试剂提质粒时,p1溶液应该加多少RNA酶?P3和P2ph必须要达到规定值么?酚氯仿可以合并么?
dxy_oeu11rar
p1 RNAase的量我用的100ug/ml酚氯仿我用的是酚:氯仿:异戊醇=25:24:1p2没调过ph,p3的ph=4.8
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问
配SDS-PAGE胶时 ,用无水乙醇封,残余的无水乙醇会对胶有影响吗?
whilt-shirt
会导致上层胶与下层胶之间出现气泡,并且胶不匀
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