难道引物会突然不适用了吗

引一般引物稀释后保存在-20可以用挺久的，4度的话可能超过一个月就不敢保证了

可能是退火温度过高，影响引物与模板结合—— 使用引物设计软件建议的退火温度，退火温度一般比引物的Tm值低5℃。其他反应条件不合适—— 选用试剂说明书建议的变性温度和时间，退火时间，延伸温度和时间，循环数。

如果你确定你的rna没有问题，重新订一下引物试试，有时候不同公司的引物可能会有差异。同一公司的引物也可能有错误

会不会是以下问题：RNA降解；引物配置是否存在问题。

实在不行就引物重新按照原来的序列合成再试试

RNA如果不立刻逆转录要保存的话建议用去离子的甲酰胺溶解并存于-20度，这样可以免遭RNA降解，另外RT结束后如果不立刻PCR，逆转录产物要放在95度水裕30分钟以降解逆转录酶。想问一下，你的引物是怎么配的？我一般把引物浓度配为25uM储存的，如果引物配制没问题那就重新定一样的引物再试试看。