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问
荧光定量PCR时应该注意什么?
Eason老歌迷
它的关键步骤在于RNA的抽提和引物的设计。RNA的抽提需要严格进行RNase free的操作,抽提的RNA OD260/OD280需严格控制在1.9-2.1之间。引物设计主要的考虑是其PCR反应特异性好和扩增效率高,进行PCR反应时无非特异性的条带和引物聚合体出现,尽量选取GC含量在40-60%的区段进行扩增。另外,还需要适应荧光定量PCR仪上机条件的设定,退火温度在55-65℃之间。除此之外,其
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问
细胞实验中D-半乳糖用什么溶解比较合适?
bamboopiggy
D-半乳糖能溶于水和吡啶,水中溶解度:680 g/L (25°C);所以需要看你的实验目的
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问
PCR实验室如何避免产生污染导致结果假阳性?
bamboopiggy
严格遵守操作规范,彻底隔离有DNA的区域和无DNA的区域
5 回答
801 围观
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问
反应后,为什么没有曲线出现
bamboopiggy
模板没有加进去?pcr的mix没配全?机器有问题?
5 回答
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问
一个基因需要纯化后的模板才能批出来,一个基因粗提的模板可以批出来,一个体系同时批这两个基因,为什么需要纯化的模板的条带反而更亮
bamboopiggy
因为纯化的模板更干净,没有杂七杂八的影响pcr过程啊
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问
小鼠基因型鉴定,pcr时不仅出现目地条带还出现一条杂带,梯度pcr时仍出现,比较诡异,想问下原因
bamboopiggy
没事是非特异性结合,鼠尾毕竟不是dna,没那么干净
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问
pcr时,扩增>5000bp片段。使用普通taq酶,还是高保真酶,更容易扩增出来?
灵枢天问
高保真酶啊,你这个片段也挺长的
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问
qPCR,探针同一种探针,标不同颜色,灵敏度是否有影响?
bamboopiggy
都一样,这个取决于探针的序列,啥颜色都可以
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问
qPCR平台期时,曲线呈现锯齿状,模板是质粒
bamboopiggy
可能是机器需要校正了,叫工程师来校一下
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1088 围观
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问
双酶切体系,BamH I30℃和Xho I37℃。如果分布酶切,官网写的1×K Buffer要用10×的稀释吗?如果一步酶切,温
bamboopiggy
不能一步酶切,俩温度不一样,最好分开切。buffer是要用10X的稀释成1X的
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1058 围观
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问
细胞免疫荧光,目标蛋白是膜蛋白,可以不用triton 打孔么?
bamboopiggy
可以啊,只要能实现实验目的就好,不一定非要打孔
4 回答
1537 围观
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问
牙髓干细胞培养条件,微生物检验和细胞培养可以共用一个无菌室吗?
bamboopiggy
可以共用,但是每次做完一定要进行无菌化处理
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646 围观
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问
红色荧光蛋白质粒转hek293t不亮怎么办
bamboopiggy
可能是你质粒构建有问题,尤其是diRed,容易产生移码,先检查质粒,如果没有问题,可以进行流式分选后,再做。
4 回答
943 围观
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问
近交系C57如何快速大量繁殖
bamboopiggy
怎么繁殖,超过10代,总会产生遗传漂变。如果10代以内,可以直接雌雄合笼,得到想要的鼠。
5 回答
2777 围观
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问
我想敲掉一个基因,过表达另一个基因,是找公司给我做质粒转染进细胞么?
bamboopiggy
你想自己做也可以啊,找公司也行,看你的经费情况。
3 回答
606 围观
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问
重叠pcr接头的设计是优先长度还是tm值?
bamboopiggy
先管重叠接头的长度,tm值可以优化
4 回答
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问
PCR结果条带大小与结果不符,或者目的条带假阳性怎么处理?
bamboopiggy
重新扩增,或者重新设计引物,改扩增程序,做好阴性阳性对照
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882 围观
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问
扩增产物在凝胶中涂布或成片状条带弥散是什么原因?
未来9
扩增产物在凝胶中涂布或成片状条带弥散可以从以下几方面找找原因呢。(1)酶量过高。减少酶量;酶的质量差,调换另一来源的酶。(2)dNTP浓度过高。减少dNTP的浓度。(3)MgCl2浓度过高。可适当降低其用量。(4)模板量过多。质粒DNA的用量应<50ng,而基因组DNA则应<200ng。(5)引物浓度不够优化。对引物进行梯度稀释重复PCR反应。(6)循环次数过多;增加模板量减少循环次数
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问
PCR实验中如何清除污染?
黄水长河
气溶胶污染很难清除,最简单有效的方法,换地点,换衣服,换移液器,换pcr相关所有试剂,没必要筛查具体什么试剂受到了污染。
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885 围观
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问
NF-kB活化的验证
汤姆卜丽波
我们测的都是核内,还是核内稳妥一点
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