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问
细胞实验中D-半乳糖用什么溶解比较合适?
bamboopiggy
D-半乳糖能溶于水和吡啶,水中溶解度:680 g/L (25°C);所以需要看你的实验目的
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问
PCR实验室如何避免产生污染导致结果假阳性?
bamboopiggy
严格遵守操作规范,彻底隔离有DNA的区域和无DNA的区域
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问
反应后,为什么没有曲线出现
bamboopiggy
模板没有加进去?pcr的mix没配全?机器有问题?
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问
一个基因需要纯化后的模板才能批出来,一个基因粗提的模板可以批出来,一个体系同时批这两个基因,为什么需要纯化的模板的条带反而更亮
bamboopiggy
因为纯化的模板更干净,没有杂七杂八的影响pcr过程啊
3 回答
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问
小鼠基因型鉴定,pcr时不仅出现目地条带还出现一条杂带,梯度pcr时仍出现,比较诡异,想问下原因
bamboopiggy
没事是非特异性结合,鼠尾毕竟不是dna,没那么干净
6 回答
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问
qPCR,探针同一种探针,标不同颜色,灵敏度是否有影响?
bamboopiggy
都一样,这个取决于探针的序列,啥颜色都可以
5 回答
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问
qPCR平台期时,曲线呈现锯齿状,模板是质粒
bamboopiggy
可能是机器需要校正了,叫工程师来校一下
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问
细胞免疫荧光,目标蛋白是膜蛋白,可以不用triton 打孔么?
bamboopiggy
可以啊,只要能实现实验目的就好,不一定非要打孔
4 回答
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问
牙髓干细胞培养条件,微生物检验和细胞培养可以共用一个无菌室吗?
bamboopiggy
可以共用,但是每次做完一定要进行无菌化处理
4 回答
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问
近交系C57如何快速大量繁殖
bamboopiggy
怎么繁殖,超过10代,总会产生遗传漂变。如果10代以内,可以直接雌雄合笼,得到想要的鼠。
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问
我想敲掉一个基因,过表达另一个基因,是找公司给我做质粒转染进细胞么?
bamboopiggy
你想自己做也可以啊,找公司也行,看你的经费情况。
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问
RT-PCR的时候96孔板加样容易出错,漏加重复加加错位置等,有什么小技巧避免?
balalaLy
可以用Marker笔在板上面划线,不要污染到孔就行,还有就是加样的时候把样品打到孔的侧壁,可以看得到,每加完一种就调整一下板的位置,这样每次加的东西都打到侧壁的不同位置,避免污染枪头,不用每加一个孔换一个枪头。
5 回答
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问
重叠pcr接头的设计是优先长度还是tm值?
bamboopiggy
先管重叠接头的长度,tm值可以优化
4 回答
1144 围观
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问
PCR结果条带大小与结果不符,或者目的条带假阳性怎么处理?
bamboopiggy
重新扩增,或者重新设计引物,改扩增程序,做好阴性阳性对照
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862 围观
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问
扩增产物在凝胶中涂布或成片状条带弥散是什么原因?
未来9
扩增产物在凝胶中涂布或成片状条带弥散可以从以下几方面找找原因呢。(1)酶量过高。减少酶量;酶的质量差,调换另一来源的酶。(2)dNTP浓度过高。减少dNTP的浓度。(3)MgCl2浓度过高。可适当降低其用量。(4)模板量过多。质粒DNA的用量应<50ng,而基因组DNA则应<200ng。(5)引物浓度不够优化。对引物进行梯度稀释重复PCR反应。(6)循环次数过多;增加模板量减少循环次数
4 回答
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问
PCR实验中如何清除污染?
黄水长河
气溶胶污染很难清除,最简单有效的方法,换地点,换衣服,换移液器,换pcr相关所有试剂,没必要筛查具体什么试剂受到了污染。
6 回答
853 围观
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问
NF-kB活化的验证
汤姆卜丽波
我们测的都是核内,还是核内稳妥一点
3 回答
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问
QPCR实验结果发现相同引物部分处理组有扩增曲线,部分组没有,其他引物在上述没有出现扩增曲线的处理组有扩增曲线,是为什么😣
mxy5120
加样的问题大点,可以重新做一次看看结果
6 回答
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问
PCR出现条带与预计大小不一致的非特异性扩增怎么处理?
bamboopiggy
你的目的条带出来了么?如果出现目的条带,可以切胶回收,如果没有出现目的条带,考虑引物不特异。或者是你pcr的退火温度不合适
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问
怎么确定pcr的退火温度,是参考值减5吗,如果两个引物退火值相差很大怎么办?
天一湖医者
1.退火温度=4×(G+C)+2×(A+T)-(5~8) 只是粗算,有时不灵,但比较简便。2.用primer5(or oligo6)计算,引物配对好后,primer5可以显示Tm,我认为这个值就是退火温度,我的经验再加2 or 3度最好。
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