重叠pcr接头的设计是优先长度还是tm值？

先管重叠接头的长度，tm值可以优化

两个都要考虑在内。引物长度一般15-30碱基。tm值最好接近72℃。这两个都要满足。

重叠pcr接头的设计是优先选择长度。

重叠PCR要成功的话，重叠的部分要有一定长度(一般有 25bp的重叠区应该够长),并且注意这部分的 GC 含量,以便使这部分(重叠的25bp) 有一个合适的 Tm 值(例如 65度),而且使用的 PCR 循环退火的温度低于此温度。