扩增产物在凝胶中涂布或成片状条带弥散是什么原因？

dxy_i7ci3kce

2022-06-08

bamboopiggy

2022-06-09

有帮助

胶不匀，pcr产物不特异，模板杂质多，产物产量太高

whilt-shirt

2022-06-09

有帮助

凝胶剂有问题，建议更换新的凝胶剂试试

balalaLy

2022-06-09

有帮助

pcr体系有问题，比如模板质量不好，酶质量不好，酶用量大了

未来9

2022-06-09

有帮助

扩增产物在凝胶中涂布或成片状条带弥散可以从以下几方面找找原因呢。

（1）酶量过高。减少酶量；酶的质量差，调换另一来源的酶。

（2）dNTP浓度过高。减少dNTP的浓度。

（3）MgCl2浓度过高。可适当降低其用量。

（4）模板量过多。质粒DNA的用量应<50ng，而基因组DNA则应<200ng。

（5）引物浓度不够优化。对引物进行梯度稀释重复PCR反应。

（6）循环次数过多；增加模板量减少循环次数至30，缩短退火时间及延伸时间，或改用二种温度的PCR循环。

（7）退火温度过低。

（8）电泳体系有问题：

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