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        PCR结果条带大小与结果不符,或者目的条带假阳性怎么处理?

        相关实验:逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR,rtpcr)

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        dxy_i7ci3kce

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        4 个回答

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        bamboopiggy

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        重新扩增,或者重新设计引物,改扩增程序,做好阴性阳性对照

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        Eason老歌迷

        有帮助

        有可能是下面几个原因,你的引物设计不合适 ,你的引物太短,靶序列或扩增产物存在交叉污染。好好检查一下是哪一步出错了

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        天一湖医者

        有帮助

        1.污染。使用全新的试剂和枪头,对工作台进行清洁。

        2. 模板或引物使用错误。更换引物和模板。

        3.基因亚型。对研究的基因进行序列分析和BLAST研究。

        user-title

        未来9

        有帮助

        条带大小不符:

        1 条带大小不对,要看相差多少,因为琼脂糖凝胶电泳只能初步鉴定目的条带,目测相差一点的话,还是值得送去测序鉴定一下是否为目的片段的。

        2如果相差很大,例如目的是500Bp, 结果条带之后100。可能是做克隆时出问题了,目的片段没有插入到载体上

        3 如果有非特异性扩增,例如2个或更多条带,那可能是引物有问题咯。

        目的条带假阳性解决方法有:操作轻柔,防止靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外造成污染;除酶及不能耐高温的物质外,所有试剂或器材高压消毒;离心管及加样枪头等一次性使用。必要时,可在加标本前,将反应管和试剂用紫外光照射,以破坏存在的核酸。

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