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        构建载体一直构建不上,可咋整?

        相关实验:简并寡核苷酸引物 PCR (DOP-PCR)

        user-title

        嘻哈哈哈321

        目的基因3000多bp,两个载体大概有6000bp和10000bp,酶切,还有pcr,引物都已经换过了,可是仍旧要么不长,要么菌p没结果,到底怎么回事啊

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        3 个回答

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        1.确保克隆到的基因完全正确:如果这一步出问题,无非两点原因:引物设计不合理,模板质量不高。解决方法:多找几个模板同时进行克隆;重新评估引物的合理性和特异性,比如将引物长度增至40 bp左右。

        2.关于酶切酶切其实要求并不十分严格,正常操作下,不论电泳检测是否十分清楚,酶切产物足够连接用量了,没必要纠结。

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        bamboopiggy

        有帮助

        1.确定你pcr产物正确。

        2.酶确实可用

        3.实在不行,试试同源重组吧

        user-title

        汤姆卜丽波

        有帮助

        这个不管是目的基因还是载体,都太长了,肯定不好连,回收的时候保证浓度然后连接时间适当延长试一试

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