实验问答

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问细胞实验中D-半乳糖用什么溶解比较合适？

bamboopiggy

D-半乳糖能溶于水和吡啶，水中溶解度：680 g/L (25°C)；所以需要看你的实验目的

3 回答2319 围观

问PCR实验室如何避免产生污染导致结果假阳性？

bamboopiggy

严格遵守操作规范，彻底隔离有DNA的区域和无DNA的区域

5 回答615 围观

问反应后，为什么没有曲线出现

bamboopiggy

模板没有加进去？pcr的mix没配全？机器有问题？

5 回答392 围观

问一个基因需要纯化后的模板才能批出来，一个基因粗提的模板可以批出来，一个体系同时批这两个基因，为什么需要纯化的模板的条带反而更亮

bamboopiggy

因为纯化的模板更干净，没有杂七杂八的影响pcr过程啊

3 回答263 围观

问小鼠基因型鉴定，pcr时不仅出现目地条带还出现一条杂带，梯度pcr时仍出现，比较诡异，想问下原因

bamboopiggy

没事是非特异性结合，鼠尾毕竟不是dna，没那么干净

6 回答2609 围观

问qPCR，探针同一种探针，标不同颜色，灵敏度是否有影响？

bamboopiggy

都一样，这个取决于探针的序列，啥颜色都可以

5 回答433 围观

问qPCR平台期时，曲线呈现锯齿状，模板是质粒

bamboopiggy

可能是机器需要校正了，叫工程师来校一下

4 回答837 围观

问细胞免疫荧光，目标蛋白是膜蛋白，可以不用triton 打孔么？

bamboopiggy

可以啊，只要能实现实验目的就好，不一定非要打孔

4 回答1270 围观

问牙髓干细胞培养条件，微生物检验和细胞培养可以共用一个无菌室吗？

bamboopiggy

可以共用，但是每次做完一定要进行无菌化处理

4 回答484 围观

问RT-PCR的时候96孔板加样容易出错，漏加重复加加错位置等，有什么小技巧避免？

balalaLy

可以用Marker笔在板上面划线，不要污染到孔就行，还有就是加样的时候把样品打到孔的侧壁，可以看得到，每加完一种就调整一下板的位置，这样每次加的东西都打到侧壁的不同位置，避免污染枪头，不用每加一个孔换一个枪头。

5 回答687 围观

问重叠pcr接头的设计是优先长度还是tm值？

bamboopiggy

先管重叠接头的长度，tm值可以优化

4 回答833 围观

问PCR结果条带大小与结果不符，或者目的条带假阳性怎么处理？

bamboopiggy

重新扩增，或者重新设计引物，改扩增程序，做好阴性阳性对照

4 回答596 围观

问扩增产物在凝胶中涂布或成片状条带弥散是什么原因？

未来9

扩增产物在凝胶中涂布或成片状条带弥散可以从以下几方面找找原因呢。（1）酶量过高。减少酶量；酶的质量差，调换另一来源的酶。（2）dNTP浓度过高。减少dNTP的浓度。（3）MgCl2浓度过高。可适当降低其用量。（4）模板量过多。质粒DNA的用量应<50ng，而基因组DNA则应<200ng。（5）引物浓度不够优化。对引物进行梯度稀释重复PCR反应。（6）循环次数过多；增加模板量减少循环次数

4 回答535 围观

问PCR实验中如何清除污染？

黄水长河

气溶胶污染很难清除，最简单有效的方法，换地点，换衣服，换移液器，换pcr相关所有试剂，没必要筛查具体什么试剂受到了污染。

6 回答535 围观

问QPCR实验结果发现相同引物部分处理组有扩增曲线，部分组没有，其他引物在上述没有出现扩增曲线的处理组有扩增曲线，是为什么😣

mxy5120

加样的问题大点，可以重新做一次看看结果

6 回答231 围观

问请问大家，PCR能测小鼠脑组织吗？有哪些注意事项？

bamboopiggy

但凡是组织都可以进行pcr，，小鼠的组织当然可以。就是注意组织一定要裂解完全

6 回答1236 围观

问PCR出现条带与预计大小不一致的非特异性扩增怎么处理？

bamboopiggy

你的目的条带出来了么？如果出现目的条带，可以切胶回收，如果没有出现目的条带，考虑引物不特异。或者是你pcr的退火温度不合适

3 回答501 围观

问在基因组长片段PCR实验中没有扩增产物可能是什么原因？

秋秋欣欣

首先是考虑模板是否有问题其次考虑引物是否设计有问题最后考虑是否是酶保存不当而失效了

6 回答1258 围观

问qpcr溶解曲线异常

Junego

1.看NTC的熔解曲线是不是和目的基因的峰值有差异，如果不同，说明是非特异性扩增。也可以将产物跑电泳看看条带是否大小不同。2.如果1中熔解曲线相同，可能有气溶胶污染。看一下Ct值差异，如果NTC和目的基因Ct值差10以上，可以分析一下相对表达量。

8 回答1258 围观

问怎么确定pcr的退火温度，是参考值减5吗，如果两个引物退火值相差很大怎么办？

天一湖医者

1.退火温度=4×(G+C)+2×(A+T)-(5～8) 只是粗算,有时不灵,但比较简便。2.用primer5(or oligo6)计算,引物配对好后,primer5可以显示Tm,我认为这个值就是退火温度,我的经验再加2 or 3度最好。

7 回答9872 围观

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