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问
Meta分析数据处理的时候,遇到数据异质性怎么处理?
whilt-shirt
出现异质性需要对每个文献进行分析,找到异质性的原因,使其同质化
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问
解靶基因序列检索以及常用引物设计原则是什么?
秋秋欣欣
引物设计的原则是:1、引物最好在模板cDNA的保守区内设计。2、引物长度一般在15-30碱基之间。3、引物GC含量在40%-60%之间,Tm值最好接近72℃。4、引物3′端要避开密码子的第3位。5、引物3′端不能选择A,最好选择T。6、碱基要随机分布。7、引物自身及引物之间不应存在互补序列。8、引物5′端和中间△G值应该相对较高,而3′端△G值较低。9、引物的5′端可以修饰,而3′端不可修饰。1
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问
弱弱的问一句,所以文献中经常看到的qRT-PCR就是Real-time RT-PCR(RT-qPCR)吗?
whilt-shirt
是的,qRT-PCR就是Real-time RT-PCR
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问
请问普通PCR一般退火温度大致在多少范围?是否可根据实际情况微调?
bamboopiggy
退火温度以55度为起始,一般是primer的low temperature-5,要是不低于55,就可以用
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问
如何撰写综述?在肿瘤靶向治疗方面
天一湖医者
撰写综述需要阅读大量的文献,需要作者检索文献,筛选文献,从文献中提取重要的信息以及进行批判性的思考。如果读文献时,自己想到的如果不及时写下来,那么在写综述的时候,就需要超级好的记忆力。不过大多数人没有这么好的记忆力,所以, 读文献时,最好能将重要的内容和自己的想法写下来。要想一下,这篇文献应该放在综述里面的什么位置。有了这些笔记,写作时再进一步组织正文就容易得多。 最好避免在没有阅读笔记时写综述,
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问
检测细胞自噬中相关蛋白表达量对于给药浓度的筛选如何设计实验
汤姆卜丽波
涉及到浓度的实验一般是采用梯度对照法,尽量控制变量在浓度上。也就是说细胞要是同一批次而且状态良好,无其他任何干扰项,以空白组为对照,设定浓度增量,每组增加一个梯度,控制时间,同一时间去检测。在这个基础上还可以做一个时间梯度。
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问
同一个批号的质控,同一天用,有的批次质控测不出o基因,有的又能测出o基因,请问是质控问题还是仪器问题?
大草原的小灰驴
有的批次质控能测出目的基因而有的测不出,这种情况的出现是否与质控品保存条件有关呢?质控品在紫外线下照射应该影响不大,因为紫外线的穿透能力比较弱,适用于物体表面的消毒。但是常温保存肯定会影响检测结果,因为质控品的稳定性较差,应当严格按照说明书的条件保存,并在有效期内使用。另外如果质控品量比较大而每次使用的量较少,应该分装后保存,避免反复冻融。
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问
请问大家,qPCR 的CT值在30多是正常的吗?
bamboopiggy
ct值在30多,目的基因可以,但是内参不行
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问
动物实验小鼠口服丁酸钠
whilt-shirt
理论上分析纯就可以,如果能买到标准品最好
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问
细胞提RNA用水溶解后放-20冰箱,第二天变紫了?
bamboopiggy
放过4度,没放过-20,你恢复室温以后,是什么样子呢?确定不是你沾到了什么颜色?
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问
真菌基因组DNA酶切后
迟C迟
如果是单酶切,线性DNA应该比环装DNA大。如果是双酶切,应该有多条带,比环装DNA小。
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问
如何取肌肉组织中的卫星细胞?
汤姆卜丽波
可以把铜网换成不锈钢筛网,这样对细胞损伤少,然后养护也方便
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问
求助,为什么siRNA后,RNA水平下降了,而蛋白水平一直不降呢?是不是应该用sh啊?
汤姆卜丽波
是不是检测出了问题,再做一次看看还是这个趋势么
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问
想问下大家,如何确定一个临床常见药物的基因靶点,想检测下它的基因多态性,谢谢~
汤姆卜丽波
一方面是通过查询现在的药物的资料,大数据分析,另一方面就是实验分析,比如多色探针熔解曲线分析
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问
请问有人遇到HUVEC细胞培养出现黑色团块这种情况吗?
一程山路
谢谢,您的意见。原代(ECM培养基)和细胞株(1640)的HUVEC都在养,发现都有黑色团块,请问可能是什么污染呢?
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问
细胞合成酪蛋白所需的基础氨基酸来自哪里?
詹姆斯邦德007
转氨基作用,由糖类、脂肪分解的中间产物转氨基而成的约十二种非必须氨基酸利用。
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问
光谱流式数据怎么解析
迟C迟
可以用流式软件FCS Express 4, de Novo Software解析原始数据。光谱解析算法可以分为两大类:监督和非监督算法。前一算法假设各个组分的参考光谱是已知的,在这种情况下,数据分析转变为一个超定方程组的解(只要通道的数量超过荧光染料的数量),通常使用最小二乘法 (LSM, Least Square Method) 来解。
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问
跑了两次wb,两次第4,5,6泳道都出现不同程度的扭曲和模糊,这是怎么回事啊?
balalaLy
1:胶的问题,可能玻璃板不行2:蛋白样品的问题,调整一下上样的位置,看看这三个样在其它位置会不会也是这样
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问
细胞周期的相关问题,求助
汤姆卜丽波
G1-S-G2-M,如果S和G2增多,那应该是阻滞在G2-M期,至于G1减少,可能是代偿作用
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问
pcr扩增效率E表现不好怎么办?
汤姆卜丽波
这种情况先确定你的模板纯度,然后引物是否匹配,退火温度和循环数可以做梯度摸索
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