实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问电转导质粒总是不成功？

dxy_g9y5gije

首先你考虑一下感受态细胞有没有问题，考虑转其它成功过的质粒尝试其次考虑一下其他转导方式比如说化学转导

4 回答1049 围观

问提取出的RNA在逆转录之前跑胶验证，这一步是杂志必须要求的么，具体怎么跑呢，和DNA一样么

汤姆卜丽波

有着杂志会要求跑一下，看RNA有无降解，保险的话还是跑一次，如果杂志要求了。步骤如下:将制胶用具用70%乙醇冲冼一遍，晾干备用。配制琼脂糖凝胶。 ①称取0.5g琼脂糖，置干净的100ml 锥形瓶中，加入40ml蒸馏水，微波炉内加热使琼脂糖彻底溶化均匀。 ②待胶凉至60--70 ℃，依次向其中加入9ml甲醛、5ml 10X MOPS缓冲液和0.5μ|溴化乙锭，混合均匀。 ③灌制琼脂糖凝胶。样品准备：

4 回答1492 围观

问RTpcr过程中提取出来的RNA必须要跑胶验证有无降解么？

bamboopiggy

如果实验严谨的话，是要跑一下的，但是现在一般提完直接逆转，除非实验出问题，很少有人会去检测RNA是否降解。

4 回答1365 围观

问做qPCR必须每次要做三个生物学重复和三个技术重复吗

balalaLy

技术重复是同样的sample在一次pcr实验中重复三个复孔，你加样熟练的话也可以只做2个复孔。三次生物学重复是收三批sample

4 回答2306 围观

问检测新冠的qPCR出来的ct值正常范围是多少？

bamboopiggy

Ct值越低，代表病毒浓度越高；Ct值越高，则表示病毒浓度越低。阳性：Ct值<37，可报告为阳性。

4 回答2763 围观

问qPCR中Mg2+浓度控制在哪个范围比较合适？

bamboopiggy

一般情况下Mg2+浓度为1.5～2.0mmol/L为宜。但是现在的qpcr的酶一般都是mix，已经给加好Mg2+了，不需要单独加

3 回答654 围观

问不同体积的 PCR 管，我该怎么选呢？

bamboopiggy

根据你的实验目的，以及你用的pcr的可以放多大的管子来决定。

3 回答557 围观

问PCR 管材质厚度不一，是不是厚点的稳定性更好呢？

bamboopiggy

这个和管壁的厚薄没啥关系，主要取决于你用的盖或膜的透光性。

3 回答167 围观

问RT值过高。最近实验细胞给药后杀伤效果跟之前相近，但同样方法下做出的RT值过高，有时候能超过40，大家帮忙提提问题

bamboopiggy

你说的是CT值过高吧？超过40基本代表没有什么表达了。要不你试试降低药物浓度，有部分细胞能活的情况下做这个实验。

3 回答439 围观

问琼脂糖凝胶电泳条带扭曲

bamboopiggy

可能是你的胶没有配匀，或者是你pcr产物的浓度抬高了。

3 回答2804 围观

问细胞形态在四代分瓶后发生改变

balalaLy

可能是细胞老化了，纤维化，尽量在第2，3代的时候进行实验

3 回答346 围观

问蛋白纯化过程中，37℃过夜摇菌产量不丰富，如果提高摇菌产量？

bamboopiggy

做预实验，确定到底是什么温度，什么转速，会影响你菌的产量，还有就是看你用的什么表达载体，不同得载体，摇菌的要求也不一样

3 回答669 围观

问石蜡包埋的样品如何检测miRNA？

bamboopiggy

有试剂盒啊，你直接买个试剂盒来提取就可以。你直接在搜索引擎里搜：石蜡包埋样品 miRNA 提取既可以找到。

3 回答354 围观

问miRNA的靶基因验证用荧光定量PCR方法还是用蛋白免疫印迹方法？

bamboopiggy

这两种方法都可以啊，最好是都做，这样更能说明问题。

3 回答270 围观

问CHIP实验超声时片段总是打的不够碎怎么办

bamboopiggy

做好预实验，多做几管，确定合适的超声强度和时间。

4 回答786 围观

问做qpcr 时候设计引物一定要垮内含子嘛？

dxy_jrj59zn3

你的意思是引物设计在两个外显子的连接点上吧？其实可以把两条引物分别在两个外显子上，这样应该会比较好

5 回答1373 围观

问qPCR的实验数据如果有很多该怎么处理呢？数据少还能一点一点算，但是多的话，真的很头疼啊

whilt-shirt

可以做一个Excel公式模板，数据复制后就能直接得出结果

3 回答338 围观

问我想问下关于circRNA环状特性鉴定实验

bamboopiggy

1.RNase R消化检测 RNase R是一种来源于大肠杆菌的核酸外切酶，它可以沿RNA的3’-5’方向切割、降解RNA，能够消化几乎所有的线性RNA分子，但不易消化呈环形的RNA、套索结构或3’端突出末端少于7 nt的双链RNA分子。RNase R检测并非是必须的，但可以作为一个很典型的实验证明和鉴定circRNA。RNase R主要用于circRNA的鉴定和富集实验，需要根据具体的实验内容和

3 回答798 围观

问求助荧光定量PCR的结果分析 RQ min和RQ max的算法？

天一湖医者

∆Ct SD =SQRT(Ct targetSD^2+Ct referenceSD^2

3 回答1233 围观

问培养液中病毒rna提取

天一湖医者

不同厂家的对比，可以参考一下选择。

2 回答395 围观

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