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问
有使用APAP导致AML12 造模肝损伤的大神没?
汤姆卜丽波
体内外实验都有见过用APAP诱导急性肝损伤的,是可以的AML21和G2都可以
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问
小鼠流式th17/treg具体步骤?
迟C迟
1、在每个流式上样管中加入100 µl准备好的细胞悬液,细胞数约为1x106个.2、按照细胞表面抗原染色方法标记表面抗原。根据说明书加入CD4和CD25抗体100 µl体系中使用0.125 µg FITC anti-mouse CD4,0.06 µg APC anti-mouse CD25抗体。最好根据这些试剂详细的说明书操作。4 ℃孵育30 分钟。孵育表面抗体之前加入Fc受体阻断剂。 3、用预冷
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问
PCR求助赐教
帝尊
勤换枪头,严格按操作流程操作,及时保养。
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问
Southern Blot酶切电泳
迟C迟
Buffer看着跑到头了,样品就很容易跑出去,还是换成长胶,电压低一点慢慢跑,注意不要跑出去。
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问
求助标准菌株的优势与来源
汤姆卜丽波
标准菌株目标产物的量及纯度都比分离株好一些,更有说服力
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问
组织切片荧光双染,DAPI染出来细胞空洞
天选打工人162h
设置了n多的对照组,排除了DAPI的问题,组织自发荧光淬灭剂A液的问题,打孔的问题,封闭的问题,预测是第二天某一步骤的试剂出了问题,等明天的结果
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问
小鼠th17/treg流式需要诱导阻断吗!
汤姆卜丽波
Monensin等阻断剂是Na+的离子载体。细胞经其处理之后,Na+、H+梯度被破坏,并且高尔基体的转运和分泌被阻断,新合成的蛋白从而滞留和浓缩在细胞内。分泌型蛋白(如细胞因子IFN-γ/IL-4/IL-17a等),在做流式检测时都应提前用Monensin或者同类的BFA(布雷福德菌素)处理4个小时以上方可检测。
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问
初步做合成肽的抑菌圈时,订购的肽纯度要选在多少呢?
汤姆卜丽波
这种程度的筛选大概纯度在75以上就够用了
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问
co-ip的两个问题
汤姆卜丽波
位置不同可能是收到了重链的干扰。避免干扰可以使用IPkine二抗,增加Input和IP泳道上样量,减少曝光时间,以及阴性对照IgG使用量建议调整到1ug以下。
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问
Huh7细胞裸鼠皮下接瘤,瘤子比较软而且外面看是黑色,请问是正常的吗
汤姆卜丽波
正常的,本来恶性肿瘤所需的血供就更充分,瘤体内含有众多细小血管,只要不破溃化脓就可以
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问
lncRNA 过表达后pull down
秋秋欣欣
可以先测一下lncRNA表达量,如果表达量比较低为了更好的实验效果可以先过表达再pull down
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问
请问微卫星灶的杂合性缺失属于微卫星不稳定吗?
汤姆卜丽波
MSI是肿瘤常见的分子遗传改变,可作为肿瘤的克隆标志应用于肿瘤的早期诊断。肿瘤常在抑癌基因位点出现LOH,应用微卫星标志容易检测,通过检测分析肿瘤染色体LOH及其规律,可在染色体一定范围内发现肿瘤的抑癌基因及易感基因,可以说一般二者伴随出现
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问
是隐窝结构嘛?
秋秋欣欣
你这个看着有点像隐窝结构。但可以在高倍镜下看看是否有绒毛。
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问
载体和DNA连接体系,怎么计算加样体积?
bamboopiggy
这个一般算的是摩尔比,你直接拿你测的浓度,除以碱基数,然后二者相比,有4-10:1就可以
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问
10%的甲醛溶液可以固定组织吗
yanlai000
可以,10%的甲醛又叫福尔马林,福尔马林一般用于正常组织染色,而4%多聚甲醛多用于需进行免疫组化或免疫荧光等需要进行抗体标记的组织,因此需要根据需要进行组织固定。
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问
大质粒转染
迟C迟
电转或者化转都试试吧,哪种转进去长出来就行,注意验证。
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问
做蛋白组学Prm之前还需要做什么实验吗
汤姆卜丽波
做 LC-MS/MS 质谱PRM检测之前,要做以下实验准备,蛋白提取、浓度测定及 SDS-PAGE 凝胶检测,质检报告;蛋白酶解、除盐,冻干机冻干;高分辨 LC-MS/MS 质谱DDA检测,搜库定性,选择母离子,高分辨,最后质谱检测,定量分析,完整报告整理。
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问
非变性蛋白电泳,植物总蛋白怎么提取呀?
迟C迟
一、植物组织蛋白质提取方法 1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液,可根据材料不同适当加入),准备提取液放在冰上。 2、把样品放在研钵中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4小时)。 3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃ 4、提取上清液,样品制备完成。 蛋白质提取液:300ml 1、1Mtris-HCl(PH8) 45ml 2、甘油(Gl
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问
响应面分析方法实际值与预测值之间的差异如何理解?怎么设计试验减少二者差异?
汤姆卜丽波
响应面分析得到的优化结果是一个预测结果,需要做实验加以验证。 如果根据预测的实验条件,能够得到相应的预测结果一致的实验结果,则说明进行响应面优化分析是成功的;如果不能够得到与预测结果一致的 实验结果,则需要改变响应面方程,或是重新选择合理的实验因素与水平。
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问
流式细胞图怎么看
yanlai000
先看物理参数的图,即FSC和SSC的图。FSC,即前向角散射,它的值代表细胞的大小,可以利用FSC值对细胞进行分群和分类。SSC,即侧向角散射,它的值代表细胞的颗粒度(granularity),可以利用细胞的SSC值初步比较细胞的颗粒度,利用SSC值对细胞进行分群和分类。然后看荧光通道的图,以CD3为横轴,CD8为纵轴为例子,画十字门后分为四个限象Q1-Q2-Q3-Q4,其分别代表Q1(CD4-C
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