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问
公司定的pcr引物如何验证是否合适?
丁香清香
可以用于正式实验的引物必须满足以下条件:a溶解曲线单峰,窄而尖,否则可能有非特异性扩增;峰的位置横坐标一般在80度以上,这个温度为PCR产物的解链温度,如果在75度附近,可能是引物二聚体,miRNA染料法检测时,溶解曲线的峰的位置可能在75度附件b琼脂糖电泳为明亮的一条带,条带一般在100bp以上,如果设计引物时PCR产物在100bp一下,需要仔细辨认是否为引物二聚体;引物二聚体的条带一般在50b
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问
qpcr
丁香清香
熔解曲线可以检验扩增反应的特异性,因此是qPCR实验的必需步骤
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问
免疫组化切片保存问题
balalaLy
用中性树胶封片可以放室温长期保存
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问
小白问,如何把活细胞和碎片分离开来?
whilt-shirt
可以用percoll分离,活细胞和细胞碎片密度不一样,离心后的层数也不一样
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问
qpcr的引物应该有什么网站或者工具可以检查它的扩增效率吗?每次设计的都不太好用
balalaLy
引物设计的软件在设计过程中就有引物质量的评价反馈,也可以到pubmed上blast一下
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问
WB一抗和内参的区别
balalaLy
要先理解什么叫内参。GAPDH跟你的目的基因一样,都是细胞中表达的某种蛋白,只不过GAPDH在诸多细胞中都有表达且表达量不容易受其它因素的影响,所以被用来作为参照,就是内参的意思
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问
384孔板,rt-qpcr实验结果的处理?
balalaLy
跟96孔板的处理一样啊,只是工作量大了而已
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问
Transwell实验用什么固定液固定细胞比较好。
balalaLy
甲醇和多聚甲醛都用过,效果差不多
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问
求助:请问进行乳腺细胞添加氨基酸试验时,细胞培养时间怎么确定?什么时候收集细胞?
balalaLy
常规都会先做一组24-96小时的
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问
肺微血管内皮细胞分离
秋秋欣欣
⼀般情况下,应⽤2 g/L的Ⅰ型或Ⅱ型胶原酶消化20 min~30 min。在某些情况下,需要再采⽤1 g/L 胰蛋⽩酶/0.1%EDTA溶液进⾏⼆次消化,但总消化的时间应控制在30 min以内,以减少微⾎管内⽪细胞的损伤。消化后的组织悬液需要⽤⾎清终⽌酶活性,并将组织悬液通过200⽬的⾦属筛去除未消化组织。
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问
药物促进细胞增殖如何确定药物最佳浓度?
bamboopiggy
一般做药物要有个IC50,你可能需要再扩大一下浓度找到一个IC50。当然目前你已经得到一个比较好的结果了,就是随药物浓度增加,促进细胞增殖的作用在增加。
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问
细胞计数和铺板
balalaLy
可能你前后计数的时候没有再次混匀,导致误差。传代不需要计数那么准确的,有些细胞多有些地方少是因为你铺板的时候没有晃匀
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2216 围观
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问
脂肪肝造模(LMH细胞)
汤姆卜丽波
油酸存储液:10mM OA+10% BSA 溶液6ml(20% BSA溶液 3ml,20mM OA溶液3ml 1:1混合)工作浓度:100-200uMOA(50X使用)棕榈酸存储液:20mM PA+20% BSA 溶液6ml(40% BSA溶液 3ml,40mM PA溶液3ml 1:1混合)工作浓度:100-400uMPA
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1407 围观
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问
免疫组化定位问题求助
bamboopiggy
你用的抗体是哪个货号?那个公司的抗体有好几个货号,看他们染肿瘤细胞,核也很干净
3 回答
717 围观
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问
TCGA数据库筛选MSI-H肿瘤样本
秋秋欣欣
在TCGA的GDC里面就可以直接搜索
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1110 围观
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问
小鼠的脾脏做流式需要用到淋巴细胞分离液吗
yanlai000
我们一般都要淋巴细胞分离液密度离心,能裂红最好
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532 围观
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问
为什么有时候pcr产物在凝胶电泳的时候跑不出加样孔?
不下雨的早晨
胶凝固的时间不够久 ,电泳液用太多次,存在蛋白污染
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968 围观
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问
羧甲基纤维素钠的粘度?
whilt-shirt
暂时没有有关CMC-Na在灌胃方向对于粘度指标得报导。一般的,建议在保证溶解度的前提下,选择粘度尽量小的CMC-Na。文献中一般在 1500 mPa.s 以下
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问
有没有适合新手做的生信综合实验
天一湖医者
可以尝试一下h1n1流感病毒分析.
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1473 围观
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问
如何把小鼠的中脑黑质分离出来呀?
汤姆卜丽波
将⼩⿏快速断头处死,取出完整脑,将脑⾄于-80度速冻5min。取出速冻好的⿏脑,⾄于冰上,切取前囟(在剥离的⿏脑上,前囟和腹侧的视交叉前缘处于同⼀垂直⾯上)后,3mm-4mm的冠状切⾯。在⿏脑切⾯上,⿊质脑区的颜⾊是与其它脑区颜⾊不同的,有⽐较清晰的界限,⽤镊⼦或者其它⼯具挖取即可。
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