实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问小胶质细胞标记物IBA1跑不出来

bamboopiggy

胶用15%的，转膜时间改为300mA，至少要1h，或者2h也可以

3 回答324 围观

问qpcr用水代替模板上机，结果仍然有曲线，是引物的问题还是被污染了？

bamboopiggy

可能是引物二聚体，也可能是水被污染了，这个要更换其中一个进行判断

3 回答728 围观

问PCR溶解曲线虽然为单峰,但峰看起来有点宽说明什么?

bamboopiggy

说明你的引物不特异，有两个size差不多大小的产物产生

3 回答627 围观

问荧光定量PCR的基线，是怎么确定的呢？

bamboopiggy

基线就是一开始基本没有读值的那些线啊，你说的应该是读CT值得那个threshold 线吧，那个就是斜率最大得地方，的一条线，现在基本由机器自己去判断了

3 回答1438 围观

问我做PCR实验，有关引物的问题？

bamboopiggy

如果不加模板也能扩增出目的条带，就是说明引物或者你加进去的东西中的某一样污染了

3 回答329 围观

问wb实验跑完结果还不错，但是发现中间有个泳道没有加样，我出图的时候可以把中间那个剪切掉吗？这算不算做假图呢？

秋秋欣欣

可以把中间泳道剪掉，重新显影。

3 回答295 围观

问自己制胶跑出来经常歪歪扭扭，怎样才能把胶跑的非常漂亮？

bamboopiggy

不能急，一定要把胶混匀，且彻底凝固后，再用

3 回答591 围观

问为什么提高大分子量蛋白的转移的时候，小分子量蛋白会丢失一些哪?什么原因?

bamboopiggy

小分子量的蛋白跑的比大分子量的快，如果为了得到更多得大分子量蛋白，会是小分子量得蛋白穿过膜，丢失了

3 回答357 围观

问WB实验目的蛋白空白，但是marker很明显，为什么？

bamboopiggy

marker明显至少转膜是转过去的了，会不会是条带位置不对？

3 回答1864 围观

问跑wb出现这种情况，是怎么回事?没有条带，全是黑点点……

秋秋欣欣

是不是转膜的时候，膜活化之前被污染了。

3 回答511 围观

问SYBR GREEN I染料需要严格避光吗？

bamboopiggy

不用那么严格，就是加好板子以后，如果不能立刻上机，最好避光保存。加板子的时候不用

6 回答3086 围观

问制作划痕实验细胞密度可以是多少为合适？

bamboopiggy

大概80-90%的细胞融合度，然后划痕后，记得换液

6 回答1895 围观

问荧光定量qPCR的重复性好吗？

bamboopiggy

复孔是需要的，如果一个板跑不开内参和目的基因，可以分两个板跑，但是要求时间间隔不能超过一周，并且必须用同一台机器

6 回答667 围观

问怎样可以让人源性星状细胞LX-2细胞能长快一点？加用细胞因子TGF-β刺激会有效果吗？或者加大培基的FBS总量？

bamboopiggy

用进口血清，如果长的太慢，可以考虑提高血清浓度到20%

3 回答264 围观

问RNA的提取时260\230

bamboopiggy

可能你提取的rna的浓度低，导致260/230比值的差异小，从而值不好

4 回答2897 围观

问做pcr的时候曲线没有峰值，出来的数每个孔差异很大，怎么解决

bamboopiggy

1.确定机器是好的，2，确定引物能用，3加样的枪和枪尖要match

3 回答311 围观

问A549细胞到底是如何形态

bamboopiggy

人非小细胞肺癌的细胞，是由D·J·Griad通过肺癌组织移植培养建系，源自于一位58岁白人男性

5 回答880 围观

问ros荧光探针

汤姆卜丽波

根据你的荧光，重新设置一下激发光长度

3 回答659 围观

问WB蛋白孵育

汤姆卜丽波

试着缩短一点一抗的孵育时间，多洗几遍看会不会好一点

3 回答371 围观

问最近在做293细胞培养，细胞老是传着传着状态就很差了，还有不明小黑点

天一湖医者

黑点可能与以下几种状况有关：1、细胞生长过老，破碎的细胞残骸;2、血清质量不好，反复冻融的成果;3、制造培育基的pH值偏高，不宜细胞生长;4、制造培育基的水质、容器不合格。可应用离心、过滤的方法去除这些黑点;5、培育原代细胞中呈现小黑点，可能是原代组织中的杂质，多次传代可以消除。

4 回答470 围观

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