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        用大肠杆菌纯化蛋白时出现包涵体怎么办?

        相关实验:含有多聚组氨酸标签重组蛋白纯化实验

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        dxy_1fxesk12

        我用大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞纯化蛋白(载体是pet-28a,加的组氨酸标签),在超声破碎的过程中,发现无论处理多长时间,菌液都是浑浊的,做了电泳发现目的蛋白都在沉淀中,求大神解答!谢谢🙏!

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        3 个回答

        user-title

        迟C迟

        有帮助

        可以用尿素(8M-10M):尿素溶解不电离,呈中性,成本低,蛋白复性后除去不会造成大量蛋白沉淀;溶解后的包涵体可选用多种色谱方法纯化。 或者用盐酸胍(6M-8M):溶解能力强,高达95%以上的溶解作用。

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        换标签试试,可以换gst标签试试。

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        bamboopiggy

        有帮助

        包涵体内的蛋白是非折叠状态的聚集体,不具有生物学活性,因此要获得具有生物学活性的蛋白质必须将包涵体溶解,释放出其中的蛋白质,并进行蛋白质的复性。

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