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Southern Blot电转法
天一湖医者
操作方法 1. 在琼脂糖凝胶上电泳分离DNA。取出凝胶,切去边缘多于部分,EB染色,在紫外灯下照相(放一标尺,可从像片中读出DNA迁移的距离)。 2. 将凝胶置于200mL变性液中,浸泡45分钟,并温和地不断振荡,使凝胶上的ds-DNA转变为ss-DNA,然后用重蒸水冲洗凝胶几次。 3. 用中和液浸泡凝胶并不断地振荡45分钟,将凝胶中和至中性。防止凝胶的碱性破坏硝酸纤维膜。 4. 取一个瓷盘,在底
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问
求助:裸鼠长毛以及皮肤角质增厚
bamboopiggy
你买的裸鼠状态确实不好了,可能这家公司的裸鼠都这样,你最好换一家公司订。
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问
请问大佬们有没有遇到过质粒转入293t中表达,但目的细胞不表达的情况?
bamboopiggy
1.用慢病毒感染293T再是一下,如果还有表达那只能说明你的目的细胞对这套系统不合适。2.可能你的细胞本身对这个筛选的抗生素抵抗,所以你筛不到目的细胞,导致wb显不出来。
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问
转膜液的配方中加甲醇的作用是什么?
Eason老歌迷
有几个原因,一个是可以降低电导,减少转膜时候的发热。二甲醇可以使sds和蛋白分离。
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问
即使两次的上样量相同,但是内参却不一样,是为什么?上样过程都是一样的
bamboopiggy
其实你觉得你上的一样,还是有误差的,只要趋势一致,或者是比值差不多就可以了。当然还有一种情况就是蛋白降解了。
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问
细胞传代最多可以传多少代?
府宅
一个人的一个细胞分裂次数有限,大约50到60次左右在动物细胞体外培养过程中细胞在培养到40-50代时,细胞的分裂速度会明显减缓,甚至完全停止。
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问
细胞为什么会出现老化现象
dxy_gwrp7ndq
1. 不要等细胞长得太满才传代。细胞太密会导致细胞状态下降,产生细胞接触性抑制。2. 细胞不要消化过度。采用胰蛋白酶消化细胞,会造成细胞表面一定程度的细胞损伤。3. 最重要的是使用优质的血清和培养基
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问
SDS-PAGE出现异常条带,比如微笑现象,拖尾现象,文理现象,条带粗等是什么原因?怎样可以避免?
府宅
纹理现象:可能是由于样本中不溶性颗粒引起的。建议:加样前离心;加适量样品促溶剂。拖尾现象:主要是样品融解效果不佳或分离胶浓度过大引起的。
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问
结肠He染色切片怎么看?怎么进行评分?
dxy_gwrp7ndq
组织切片HE染色评分表如图所见。
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问
求助 Collagenase A 是几型胶原酶?
府宅
Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝细胞专用胶原酶,是按照胶原酶消化的组织类型分类的,应该是属于单一成分。A、B、D、P、H型,是按照罗氏胶原酶产品分类的,应该是属于混合成分。
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问
荧光素酶报告基因检测仪器
bamboopiggy
没法用荧光分光光度仪,只能用化学发光仪或者多功能酶标仪。如果实验室没有,去问问隔壁实验室或者你们学校的实验平台有没有。
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问
想做双酶切,出来的条带很浅,请问质粒浓度达到多少酶切的效果比较好?
天一湖医者
质粒浓度一般以μg/ml来计算,一般双酶切使用质粒的量为20μl使用1μg左右质粒。
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问
WB结果中可能出现有目标蛋白条带,但是目标条带在膜上颜色较浅,请问这是什么原因呀?
天一湖医者
转膜不充分 规范转膜的操作;优化电转条件;可将两张膜叠加在一起,防止转膜过度,或使用小孔径膜洗膜过度 洗膜时间不宜过长,加入的去垢剂不宜过强或过多,减少洗膜次数,洗膜时间和温度封闭过度 减少封闭时间,试用不同的封闭液曝光时间过短 延长曝光时间,如使用化学发光成像系统,可调整显示灰度值抗体染色不充分 延长孵育时间或增加抗体浓度抗体问题 抗体浓度低 增加抗体浓度抗体和抗原亲和力不足 增加抗体浓度抗体活
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问
大鼠踝关节滑膜怎么取?
ZIWENHUA
将大鼠浸泡于10 %强力消毒冷溶液中10 分钟, 在超净工作台, 仰位固定,常规碘酒、酒精消毒术野。沿膝关节正中纵行切开皮肤直至暴露出以膝关节为中心约3cm ×3cm 的区域, 以有齿镊提起髌骨。沿髌骨上缘约013 ~014cm 处向下切割直至股骨, 再分别沿髌骨两侧向下分离至胫骨, 此时即打开了膝关节腔, 可见由髌骨下缘向上延缓有一层平滑光亮呈淡黄色的滑膜组织。完整剥离滑膜组织, 最后以眼科镊轻
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问
Western Blot还需要剪膜么?
一只软妹
可以剪,不剪的话容易有其他非特异性结合,容易脏
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问
WB条带的背景
秋秋欣欣
可能是你没封闭后,一抗可以用奶粉直接稀释抗体,洗膜的时候可以多洗几次,水换勤一些
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问
养细胞求助
dxy_gwrp7ndq
很可能是黑胶虫,这也没什么特别好的方法。
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问
rip对照实验的设计
天雨心晴
敲低,原始,和空载三个都要做。
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问
结直肠癌转染
秋秋欣欣
220-300V都可以,或者就用脂质体转染
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问
求助:如何获取Cochrane的试验数据
秋秋欣欣
搜索一下这个CBMdisc cochrane
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