为什么引物的3＇端不能进行任何修饰，也不能有形成任何二级结构的可能，3＇端碱基尽量不选用T？

因为引物的延伸是从3′端开始的，3′端不要终止于密码子的第3位,尽量不要用T,因为密码子第3位易发生简并,会影响扩增的特异性与效率。

因为PCR反应中是从引物的3‘端开始合成新DNA链的。所以新合成的DNA链中，原来的引物在5‘端，新加入的碱基在3‘端。

引物3’端为关键碱基，是PCR延伸的起始端，不能进行任何修饰，也不能形成二级结构的可能，一般3‘端也不能发生错配，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。

因为引物的延伸是从 3’ 端开始的