有时候做完WB，发现非特异性条带很多（如图所示），请问可能是什么原因？怎么解决？

你这个跑的是啥蛋白啊?我感觉是你的抗体特异性差，全是杂带

这个可能是你的抗体不特异的原因，你要么换个抗体，要么把膜裁到你需要的条带附近的位置

1.抗体浓度过高；降低一抗、二抗的浓度，可以分梯度进行。

2.一抗的特异性不足；使用单克隆抗体，单克隆位点的抗原表位是唯一的，多克隆位点的表位不唯一。

3.二抗的非特异性结合，不加一抗，其他操作不变，即可检测出二抗的非特异性的条带是否来自二抗的非特异性结合；此时需要重新选择二抗。

4.样品蛋白质上样量过大；降低上样量，可以分梯度进行。

5.样品蛋白质发生了降解，降解产物成为了一抗或二抗的新的抗原，尤其是在一抗或二抗不是单克隆抗体时更为明显；避免对样品蛋白质反复冻融，食用新鲜的蛋白质样品，可以使用蛋白酶的广谱抑制剂（已经有商用产品），必要的话使用分子筛层析或HPLC纯化蛋白质样品后再上样（HPLC不能用于蛋白质制备，不过用做WB的量还是能够提供的）。

6.细胞传代过多，导致蛋白质变异。使用传代次数少的细胞的表达的蛋白质进行对比，并且作为分子筛层析或HPLC的纯化标准，分子筛层析或HPLC能够分离出构象差异的同分异构体。可以在上样前，用红外、紫外光谱检测一下，并且对比标准品的数据。